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지방줄기세포에서 신경줄기세포, 신경세포 및 가바성 신경세포로의 분화 유도 방법(Differentiation method of adipose-derived mesenchymal stem cells into neural stem cells, neural cells, and GABAergic neural cells)

  • 기술번호 : KST2017016198
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 지방세포 유래 중간엽 줄기세포를 신경줄기세포, 신경세포 및 가바성 신경세포로 분화시키는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 지방세포 유래 중간엽 줄기세포를 세포 배양 배지에 저분자 억제제인 SB431543, Noggin, 및 LDN193189를 첨가하여 6 내지 8일간 배양하고(단계 1: 전-처리 단계), 그런 다음, B27, N2, 및 ascorbic acid를 첨가한 배지에 5일간 배양하고(단계 2: 신경 유도 단계), bFGF 및 EGF를 첨가한 배지에서 5 내지 7일간 더 배양하여(단계 3: 증식 단계), 신경 줄기세포로 분화시키고, 상기 단계 3의 세포 배양액에 purmorphamine 및 BDNF(Brain-derived neurotrophic factor)를 첨가한 배지를 이용하여 추가적으로 신경세포로 분화시켰으며, 또한, 상기 단계 2의 세포 배양액에 purmorphamine 및 BDNF와 dbcAMP 및 BDNF을 첨가한 배지를 이용하여 상기 신경세포를 가바성 신경세포로 분화시키는 방법을 확립하여, 본 발명은 인간 신경세포 또는 GABA분비 개재뉴런의 발달과 연관된 분자 기작을 확인하는데 유용하게 사용될 수 있으며, 본 발명의 분화방법을 이용한 시험관상에서 특정 질병의 성질을 가진 성체중간엽줄기세포로부터 유도된 신경세포 또는 유도된 GABA분비 개재신경세포는 신경학적 질병 규명과 약물 스크리닝에 유용하게 사용될 수 있다.
Int. CL C12N 5/0793 (2016.07.19) C12N 5/0797 (2016.07.19) G01N 33/50 (2016.07.19)
CPC C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01) C12N 5/0619(2013.01)
출원번호/일자 1020160088435 (2016.07.13)
출원인 서울대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2017-0116921 (2017.10.20) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020160044968   |   2016.04.12
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.07.13)
심사청구항수 10

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 장미숙 대한민국 서울특별시 종로구
2 박지혜 대한민국 서울특별시 종로구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 두호특허법인 대한민국 서울특별시 강남구 언주로***, *층(논현동,시그너스빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 케이셀바이오뱅킹 주식회사 서울특별시 성동구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.07.13 수리 (Accepted) 1-1-2016-0676731-23
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.08.10 수리 (Accepted) 1-1-2016-0774877-56
3 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2016.11.30 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-1175397-37
4 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.12.01 수리 (Accepted) 1-1-2016-1181462-04
5 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2016.12.16 수리 (Accepted) 1-1-2016-1236198-12
6 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.12.16 수리 (Accepted) 1-1-2016-1236398-47
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2017.09.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0648392-28
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.11.15 수리 (Accepted) 1-1-2017-1135529-86
9 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.12.12 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-1238267-56
10 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.12.12 수리 (Accepted) 1-1-2017-1238268-02
11 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2018.02.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0132987-16
12 [법정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
 2018.03.28 수리 (Accepted) 1-1-2018-0309692-02
13 법정기간연장승인서
 2018.04.02 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2018-0049614-12
14 [명세서등 보정]보정서(재심사)
Amendment to Description, etc(Reexamination)		 2018.04.27 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2018-0422028-89
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2018.04.27 수리 (Accepted) 1-1-2018-0421991-43
16 등록결정서
Decision to Grant Registration		 2018.05.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0351791-90
17 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2019-5093546-10
18 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.23 수리 (Accepted) 4-1-2019-5101798-31
19 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5154561-59
20 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.11.25 수리 (Accepted) 4-1-2020-5265458-48
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번호 청구항
1 1
1) 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(adipose-derived mesenchymal stem cell; ADSC)를 BMP(bone morphogenic protein) 억제제, TGF(transforming growth factor) 베타 신호전달 저해제를 포함하는 배지에서 배양하는 단계;2) 상기 단계 1)을 통해 배양된 세포를 B27, N2, 및 ascorbic acid를 포함하는 배지에서 배양하는 단계; 및3) 상기 단계 2)를 통해 배양된 세포를 표피성장인자(epidermal growth factor; EGF) 및 염기성 섬유모세포성장인자(basic fibroblast growth factor;bFGF)를 첨가한 배지에서 배양하는 단계;를 포함하고,상기 단계 1)의 BMP 억제제는 Noggin 및 LDN193189이고, TGF 베타 신호전달 저해제는 ALK(activin receptor-like kinase) 수용체 저해제인 SB431542인, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 신경줄기세포(neural stem cell)로 분화시키는 방법
2 2
삭제
3 3
제 1항에 있어서, 상기 Noggin은 0
4 4
삭제
5 5
제 1항에 있어서, 상기 SB431542는 1 내지 200 μM의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 신경줄기세포로 분화시키는 방법
6 6
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 6 내지 10일, 상기 단계 2)의 배양은 3 내지 7일, 및 상기 단계 3)의 배양은 5 내지 9일 동안 실시하는 것을 특징으로 하는, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 신경줄기세포로 분화시키는 방법
7 7
1) 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(adipose-derived mesenchymal stem cell; ADSC)를 BMP(bone morphogenic protein) 억제제, TGF(transforming growth factor) 베타 신호전달 저해제를 포함하는 배지에서 배양하는 단계;2) 상기 단계 1)을 통해 배양된 세포를 B27, N2, 및 ascorbic acid를 포함하는 배지에서 배양하는 단계;3) 상기 단계 2)를 통해 배양된 세포를 표피성장인자(epidermal growth factor; EGF) 및 염기성 섬유모세포성장인자(basic fibroblast growth factor; bFGF)를 첨가한 배지에서 배양하여 신경줄기세포로 분화시키는 단계; 및4) 상기 단계 3)의 신경줄기세포를 purmorphamine 및 BDNF(brain-derived neurotrophic factor)를 첨가한 배지에서 배양하는 단계;를 포함하고,상기 단계 1)의 BMP 억제제는 Noggin 및 LDN193189이고, TGF 베타 신호전달 저해제는 ALK(activin receptor-like kinase) 수용체 저해제인 SB431542인, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 신경세포(neuron)로 분화시키는 방법
8 8
제 7항에 있어서, 상기 단계 4)의 purmorphamine은 0
9 9
제 7항에 있어서, 상기 단계 4)의 배양은 10 내지 16일 동안 실시하는 것을 특징으로 하는, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 신경세포로 분화시키는 방법
10 10
1) 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(adipose-derived mesenchymal stem cell; ADSC)를 BMP(bone morphogenic protein) 억제제, TGF(transforming growth factor) 베타 신호전달 저해제를 포함하는 배지에서 배양하는 단계;2) 상기 단계 1)을 통해 배양된 세포를 B27, N2, 및 ascorbic acid를 포함하는 배지에서 배양하는 단계;3) 상기 단계 2)를 통해 배양된 세포를 purmorphamine 및 BDNF(brain-derived neurotrophic factor)를 첨가한 배지에서 배양하여 신경세포로 분화시키는 단계; 및4) 상기 단계 3)을 통해 분화된 신경세포를 dbcAMP(dibutyryl cyclic AMP) 및 BDNF(brain-derived neurotrophic factor)를 첨가한 배지에서 배양하는 단계;를 포함하고,상기 단계 1)의 BMP 억제제는 Noggin 및 LDN193189이고, TGF 베타 신호전달 저해제는 ALK(activin receptor-like kinase) 수용체 저해제인 SB431542인, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 가바성 신경세포(GABAergic neuron)로 분화시키는 방법
11 11
제 10항에 있어서, 상기 단계 4)의 dbcAMP는 0
12 12
제 10항에 있어서, 상기 단계 4)의 배양은 10 내지 22일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포를 가바성 신경세포로 분화시키는 방법
13 13
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