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5'-아암(arm)으로서, 서열번호 1로 기재되는 핵산서열로 구성되며 소 베타-카제인 게놈 DNA의 프로모터, 엑손 2의 일부를 포함하는 5' 말단 단편; 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 유전자; 및 3'-아암(arm)으로서, 서열번호 2로 기재되는 핵산서열로 구성되며 소 베타-카제인 게놈 DNA의 엑손 4, 5 및 6을 포함하는, 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터 및 CRISPR/Cas9 인공효소를 포유동물의 수정란에 미세주입하는 미세주입단계;상기 미세주입한 수정란을 배반포기까지 배양하는 배양단계;상기 배반포기 수정란의 DNA를 추출하여 PCR로 증폭하는 증폭단계; 및상기 증폭된 PCR 산물의 유무 및 크기를 판별하여 상기 벡터가 소 베타-카제인 게놈 DNA의 제 위치로 삽입된 것을 확인하는, 넉-인 방법
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제1항에 있어서,상기 치료용 단백질은 인간 락토페린(lactoferrin)인, 넉-인 방법
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제2항에 있어서,상기 인간 락토페린을 코딩하는 유전자는 서열번호 3으로 기재되는 핵산서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드인, 넉-인 방법
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제2항에 있어서,상기 인간 락토페린을 코딩하는 유전자의 3' 말단에 polyA 신호가 추가로 연결된, 넉-인 방법
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제2항에 있어서, 상기 인간 락토페린을 코딩하는 유전자의 3' 말단에 융합 형광 단백질의 발현을 확인하기 위한 리포터 유전자(reporter gene)가 추가로 연결된, 넉-인 방법
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6
제5항에 있어서, 상기 형광단백질은 녹색형광단백질(green fluorescent protein, GFP), 황색형광단백질(yellow fluorescent protein, YFP), 적색형광단백질(red fluorescent protein, RFP), 주황형광단백질(orange fluorescent protein, OFP), 청록색형광단백질(cyan fluorescent protein, CFP), 청색형광단백질(blue fluorescent protein, BFP) 또는 원적색형광단백질(far-red fluorescent protein)인, 넉-인 방법
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7
제1항에 있어서, 음성 선별마커(negative selectable marker)를 함께 포함하는, 넉-인 방법
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제7항에 있어서,상기 음성 선별마커는 디프테리아 톡신(DT-A) 유전자인, 넉-인 방법
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삭제
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제1항에 있어서,상기 CRISPR/Cas9 인공효소는 서열번호 15로 기재되는 핵산서열을 표적으로 하는, 넉-인 방법
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제1항 내지 제8항 및 제10항 중 어느 한 항의 넉-인 방법으로 숙주세포에 형질전환시킨, 치료용 단백질 대량생산용 형질전환 소
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제1항 내지 제8항 및 제10항 중 어느 한 항에 따른 넉-인 방법으로 인간을 제외한 포유동물의 수정란 내로 도입하여, 치료용 단백질을 발현시키는 단계를 포함하는, 치료용 단백질의 생산방법
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