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유도만능줄기세포(Induced Pluripotent Stem Cell)의 분화를 유도하여 각막 줄기세포 유사 세포주를 배양하는 방법으로서,유도만능줄기세포를 각막 줄기세포 유사 세포주로 분화하도록 유도하기 위해, 피더 비포함 배지(feeder free culture medium)에 BMP4 및 Wnt3a를 순차적으로 첨가하는 과정; 및상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 배양하는 과정;을 포함하는 방법
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제 1항에 있어서, 각막 상피 세포로 분화를 유도하기 전에,피더 비포함 배지를 제조하는 과정;상기 피더 비포함 배지에 유도만능줄기세포를 첨가하여 배양하는 과정; 및상기 피더 비포함 배지에 줄기세포 성장 환경 조성용 첨가제를 첨가하는 과정을 더 포함하는 방법
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제 2항에 있어서, 상기 피더 비포함 배지를 제조하는 과정은, DMEM F12, L-아스코르브산, 아셀렌산 나트륨(Sodium selenite), 및 염화 나트륨을 포함하는 기본 배지를 준비하는 과정;상기 기본배지에 유도만능줄기세포 배양용 첨가제를 첨가하는 과정; 및상기 기본배지에 비트로넥틴 재조합 인간 단백질을 코팅하여 피더 비포함 배지(feeder free culture medium)를 제조하는 과정을 포함하는 방법
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제 1항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 배양하는 방법
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제3항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포 배양용 첨가제는 홀로 트랜스페린(Holo transferrin), bFGF, TGF 베타1, 및 인슐린을 포함하는 방법
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제2항에 있어서, 상기 줄기세포 성장 환경 조성용 첨가제는 EGF 및 인슐린을 포함하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 BMP4 및 Wnt3a를 순차적으로 첨가하는 과정에서, BMP4를 첨가하고 2일 내지 4일간 처리 후 Wnt3a를 첨가하는 방법
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제7항에 있어서, 상기 BMP4 및 Wnt3a를 순차적으로 첨가하는 과정에서, Wnt3a를 첨가하고 2일 내지 4일간 처리하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 PI 배양액은 판세린(Panserin):이소코브 미디아(Isocove Media)를 중량을 기준으로 2:1 내지 1:2로 포함하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 1주 내지 3주 동안 배양하는 방법
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제10 항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 배양 후, 계대 배양하는 과정을 더 포함하는 방법
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제11항에 있어서, 상기 계대 배양 시, 계대 배양액은 에피 미디아(Epi media), FBS, 히드로코르티손, 인슐린, 콜레라독소(choleratoxin), 및 EGF를 포함하는 방법
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제11항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 3주 동안 배양한 후 계대 배양하는 방법
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유도만능줄기세포의 분화를 유도하여 각막 줄기세포 유사 세포주를 배양하는 시스템으로서,DMEM F12, L-아스코르브산, 아셀렌산 나트륨(Sodium selenite), 및 염화 나트륨을 포함하는 기본 배지에 유도만능줄기세포 배양용 첨가제를 첨가하고, 비트로넥틴 재조합 인간 단백질을 코팅하여 제조된 피더 비포함 배지;상기 피더 비포함 배지에서 배양된 유도만능줄기세포;상기 피더 비포함 배지에 첨가되는 줄기세포 성장 환경 조성용 첨가제;상기 피더 비포함 배지에서 배양된 유도만능줄기세포 및 줄기세포 성장 환경 조성용 첨가제가 포함된 배지에 유도만능줄기세포를 각막 상피 세포로 분화하도록 유도하기 위해 순차적으로 첨가되는 BMP4 및 Wnt3a 및상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 배양하기 위한 PI배양액;을 포함하는 시스템
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제14항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양 후, 계대 배양하기 위한 계대 배양액을 더 포함하는 시스템
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