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유도만능줄기세포(Induced Pluripotent Stem Cell)의 분화를 유도하여 각막 상피세포를 배양하는 방법으로서,배양된 유도만능줄기세포를 각막 줄기세포로 분화시키기 위하여 분화용 배지에 BMP4 를 첨가하는 과정;상기 분화용 배지에 BMP4를 첨가하는 과정 이후, 각막 상피세포로 분화시키기 위하여 Wnt3a 및 miRNA를 순차적으로 첨가하거나, 또는 Wnt3a 및 miRNA를 동시에 첨가하는 과정; 및상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 배양하는 과정;을 포함하고,상기 miRNA는 각막 윤부조직, 각막 상피세포, 각막 줄기세포의 외식 세포, 및 유도만능줄기세포에서 분리한 RNA를 miRNA 어레이 분석을 이용하여 선별한 것이고, 상기 miRNA는 miR126, miR155 및 miR205로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상인 방법
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제 1항에 있어서, 상기 각막 줄기세포로 분화시키기 전에,피더 비포함 배지(feeder free culture medium)를 제조하는 과정;상기 피더 비포함 배지에 유도만능줄기세포를 첨가하여 배양하는 과정; 및상기 피더 비포함 배지에서 배양된 유도만능줄기세포를 분화용 배지에서 배양하는 과정을 포함하는 방법
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제 2항에 있어서, 상기 피더 비포함 배지를 제조하는 과정은, DMEM F12, L-아스코르브산, 아셀렌산 나트륨(Sodium selenite), 및 염화 나트륨을 포함하는 기본 배지를 준비하는 과정;상기 기본배지에 유도만능줄기세포 배양용 첨가제를 첨가하는 과정; 및상기 기본배지에 비트로넥틴 재조합 인간 단백질을 코팅하여 피더 비포함 배지(feeder free culture medium)를 제조하는 과정을 포함하는 방법
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제 1항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 배양하는 방법으로서,상기 PI 배양액은 판세린(Panserin):이소코브 미디아(Isocove Media)를 중량을 기준으로 2:1 내지 1:2로 포함하는 방법
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제3항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포 배양용 첨가제는 홀로 트랜스페린(Holo transferrin), bFGF, TGF 베타1, 및 인슐린을 포함하는 방법
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제2항에 있어서, 상기 분화용 배지는 hES 미디아, 녹아웃 혈청 대체제, L-글루타민, MEM NEAA, 2-머캡토에탄올, 및 bFGF를 포함하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 BMP4를 첨가하는 과정에서, BMP4를 첨가하고 2일 내지 4일간 처리하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 Wnt3a 및 miRNA를 순차적으로 첨가하는 경우, Wnt3a를 첨가하고 2일 내지 4일간 처리 후 miRNA를 첨가하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포로부터 분화된 세포를 PI 배양액에서 1주 내지 3주 동안 배양하는 방법
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