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인간 다능성 줄기세포로부터 유래된 심근세포를 이용한 in vitro 심장독성 평가 기술(in vitro cardiotoxicity testing using human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes)

  • 기술번호 : KST2018003183
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 세포 외 미세 환경을 모사할 수 있는 매트리겔(matrigel)을 기반으로, 인간 다능성 줄기세포를 심근세포(cardiomyocytes)로 분화시킨 후, 전기생리학적 방식으로 약물-유도성 심장독성을 평가하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 인간 다능성 줄기세포(human pluripotent stem cell; hPSCs)의 분화 시작 단계(d-3)에서 세포 외 3차원 미세 환경을 매트리겔(Matrigel)을 이용하여 구성한 후, wnt 신호를 활성 및 억제할 수 있는 소분자(CHIR99021, IWP4)를 처리하여, 심근세포 분화 성공률이 92%를 나타냈으며, 중배엽으로의 유도를 현저히 촉진하고 심근세포로의 분화를 매우 효과적으로 유도할 수 있음을 확인하였다(84%). 또한 분화를 마친 심근세포에서 패치 클램프(patch clamp) 실험기법을 통해 전기생리학적 특성을 확인하여 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(hPSC-CMs)가 인체 내 심근세포와 유사할 뿐만 아니라 전기생리학적 특성 및 약물 유발성 부정맥을 효과적으로 재현할 수 있음을 확인하였고, 잠재적인 부정맥 유발성 약물들의 독성평가시험 모델로써 사용할 수 있음을 최종 확인하여, 본 발명의 인간 다능성 줄기세포로부터 유래된 심근세포는 약물-유도성 심장독성을 평가하는 방법에 사용될 수 있다.
Int. CL G01N 33/50 (2017.01.01) C12N 5/077 (2010.01.01)
CPC G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01) G01N 33/5073(2013.01)
출원번호/일자 1020160115572 (2016.09.08)
출원인 한국화학연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2018-0028190 (2018.03.16) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.09.08)
심사청구항수 8

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국화학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김기석 대한민국 대전광역시 유성구
2 이향애 대한민국 대전광역시 유성구
3 이수정 대한민국 대전광역시 유성구
4 김재곤 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국화학연구원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.09.08 수리 (Accepted) 1-1-2016-0877697-72
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2017.06.15 수리 (Accepted) 1-1-2017-0572772-13
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2017.07.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2017.09.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2017-0139602-06
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2017.09.14 수리 (Accepted) 4-1-2017-5149242-13
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2017.09.14 수리 (Accepted) 4-1-2017-5149265-52
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2017.09.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0667818-77
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.11.21 수리 (Accepted) 1-1-2017-1160577-43
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.12.20 수리 (Accepted) 1-1-2017-1272043-23
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.12.20 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-1272075-84
11 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2018.04.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0284479-09
12 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2018.06.25 수리 (Accepted) 1-1-2018-0619699-58
13 등록결정서
Decision to grant		 2018.10.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0728050-18
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번호 청구항
1 1
1) 매트리겔(matrigel)이 코팅된 배양용기 및 매트리겔이 포함되지 않은 배지에서 인간 다능성 줄기세포(human pluripotent stem cell; hPSCs)를 배양하는 단계;2) 상기 단계 1)의 세포를 매트리겔이 첨가된 배지에서 배양하는 단계;3) 상기 단계 2)의 세포를 wnt 신호 전달 촉진제 및 매트리겔을 포함하고 인슐린이 첨가되지 않은 배지에서 배양하는 단계;4) 상기 단계 3)의 세포를 wnt 신호 전달 억제제를 포함하고 인슐린이 첨가되지 않은 배지에서 배양하는 단계;5) 상기 단계 4)의 세포를 2 내지 20 μM의 농도로 인슐린이 포함된 배지에서 배양하는 단계; 및6) 상기 단계 5)의 세포에 피검물질을 처리한 후, 이온채널의 전류를 측정하는 단계를 포함하는, 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 인간 다능성 줄기세포는 배아줄기세포(human embryonic stem cell; hESCs) 또는 유도만능줄기세포(Human induced pluripotent stem cells; hiPSCs)인 것을 특징으로 하는 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
3 3
제 1항에 있어서, 상기 단계 3)의 wnt 신호 전달 촉진제는 CHIR99021인 것을 특징으로 하는 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 단계 4)의 wnt 신호 전달 억제제는 IWP4인 것을 특징으로 하는 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
5 5
삭제
6 6
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 배양은 3 내지 7일, 단계 3)의 배양은 1 내지 3일, 단계 4)의 배양은 1 내지 3일인 것을 특징으로 하는 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
7 7
제 1항에 있어서, 상기 단계 6)의 세포는 cTnT(Cardiac troponin T), α-actinin, 및 Myosin Heavy Chain(MYH)를 발현하는 심근세포인 것을 특징으로 하는 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
8 8
제 1항에 있어서, 상기 단계 6)의 피검물질은 독성물질 또는 약물후보 물질인 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
9 9
제 8항에 있어서, 상기 독성물질은 부정맥을 유발하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포 유래 심근세포(human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes; hPSC-CMs)를 이용한 심장독성 평가방법
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패밀리정보가 없습니다
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1 미래창조과학부 안전성평가연구소 바이오 의료기술개발사업 줄기세포기술을 활용한 고효율 독성평가시스템 구축
2 미래창조과학부 안전성평가연구소 신약평가 예측용 기반기술개발 사업 조직공학기반 의약품 평가 플랫폼 개발사업