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지지세포를 이용한 활성화된 자연살상세포의 제조방법에 있어서, 23 ~ 27 Gy의 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)를 지지세포로 이용하고 항-CD16 항체를 처리하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 다음 단계들을 포함하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법:a) 인간의 말초혈액으로 부터 말초혈액단핵구(PBMC)를 분리하는 단계;b) 상기 분리된 말초혈액단핵구에서 자연살상세포(NK cell)를 분리하는 단계;c) 상기 자연살상세포 분리후 남은 말초혈액단핵구(PBMC)에 방사선을 조사하여 지지세포를 준비하는 단계; 및d) 상기 분리된 자연살상세포(NK cell)와 준비된 지지세포를 항-CD16 항체가 고형화된 배양용기에 넣고 배양하는 단계
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제2항에 있어서, 상기 b) 단계에서 분리된 말초혈액단핵구로 부터 마그네틱 미세구슬(magnetic microbead)이 부착된 항체를 이용하여 칼럼을 통해 자연살상세포(NK cell)를 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제2항에 있어서, 상기 c) 단계에서 NK 세포 분리 후 남은 말초혈액단핵구(PBMC)를 생리식염수 또는 배지에 잘 혼합하여 23 ~ 27 Gy의 방사선을 조사하여 지지세포를 준비하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제2항에 있어서, 상기 d) 단계에서 분리된 NK 세포에 항-NKG2D 및 항-2B4 항체를 처리하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)는 T 세포 활성을 억제하고 NKG2D 리간드 및 CD48 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 NK 세포의 증식이 촉진되는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, CD16, NKG2D 및 2B4 활성화 수용체의 시너지 조합 (synergistic combinations)에 의해 NK 세포의 증식이 강하게 유도되는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 NK 세포의 활성화 수용체의 발현이 증가되는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 증식된 NK 세포에서 CD107a가 높게 발현되는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 증식된 NK 세포는 표적종양세포의 자극에 의해 IFN-γ 분비를 강력히 증가시키는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 증식된 NK 세포는 표적종양세포에 대한 항종양 세포독성을 강하게 증가시키는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 방사선이 조사된 말초혈액단핵구(PBMC)와 항-CD16 항체의 병용에 의해 증식된 NK 세포는 암 유발 마우스 모델에서 항종양효과를 강하게 유도하는 것을 특징으로 하는 활성화된 자연살상세포(NK cell)의 제조방법
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