| 요약 |
본 발명은 복제 개의 생산방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 acteoside로 처리한 공여세포를 이용한 것을 특징으로 하는 복제 개의 생산방법 및 그에 따른 복제 개에 관한 것이다.본 발명은 개과 동물로부터 공여세포를 분리배양하는 과정(1과정),상기 공여세포에 대한 세포 배양 배지 처리하는 과정(2과정),개과 동물의 수핵난자의 준비 과정(3과정),체세포 복제견을 생산하는 과정을 수행하되(4과정),상기 수핵난자의 난자 주위의 난구세포를 제거하는 과정(4-1과정),상기 수핵난자들을 탈핵하는 과정(4-2과정),상기 탈핵된 난자에 상기의 세포 배양 배지 처리된 공여세포를 주입하는 과정(4-3과정),상기의 공여세포가 주입된 결합체 (couplets)를 융합 배지에 침전시키고, 바늘 형의 전극을 사용하여 전기 자극을 주어 난자 세포질과 세포를 융합시키는 과정(4-4과정),상기 융합된 수정란을 돼지접합체배지 (PZM-3)에서 배양함으로써 활성화를 유도하는 과정(4-5과정),상기 복제된 수정란을 세척한 후 PZM-3 내에서 추가로 배양하는 과정(4-6과정)상기 배양된 체세포 복제란을 발정주기가 일치하는 대리모의 난관으로 수술적 방법으로 이용해 이식하는 과정(4-7과정),을 포함하는 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다.또한 본 발명은 상기 공여세포에 대한 세포 배양 배지 처리하는 과정(2과정)은10% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포를 배양하는 과정, 또는 0.5% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포를 배양하는 과정,또는 10% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포 배양하다가 acteoside를 배양 배지에 첨가하여 배양하는 과정인 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다.또한 본 발명은 개과 동물로부터 공여세포를 분리배양하는 과정(1과정)은개과 동물의 태아를 제왕절개 방법으로 회수하는 과정(1-1과정),회수된 태아는 실험실로 운반하여 머리와 사지를 제거하고 몸통만 PBS (Phosphate buffered saline)로 세척하는 과정(1-2과정),상기 세척 후 남아있는 조직은 잘게 자르고 15% (v/v) FBS (invitrogen), 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 배양 접시에서 배양하는 과정(1-3과정),상기 배양접시에 붙지 않은 조직은 제거하고 부착된 세포들을 컨플루언시(confluency)까지 배양하는 과정(1-4과정),상기 배양된 세포를 트립신 처리하고 DMSO를 첨가한 FBS를 사용하여 액체 질소 내에서 동결 저장하는 과정(1-5과정)을 포함하는 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다.또한 본 발명은 상기한 방법에 의하여 생산된 복제 개를 제공한다.
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