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(1) 심장줄기세포(cardiac stem cells; CSCs)를 분리하여 배양하는 단계;(2) 상기 배양된 2 × 106/ml 내지 5 × 106/ml 밀도의 심장줄기세포를 최종 농도 0
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제1항에 있어서, 상기 심장줄기세포는 심근 조직으로부터 분리된 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (2) 단계의 배양된 심장줄기세포는 트롬빈 용액에 첨가된 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 물리적 지지가 유지되는 부착배양조건은 심장줄기세포가 함입된 하이드로젤을 원형, 직사각형, 혹은 정사각형 형태의 몰드 내로 캐스팅(casting)하여 물리적으로 지지되는 조건에서 배양하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 심장줄기세포에서 생성되어 분비되는 세포외기질 (extracellular matrix, ECM)을 피브린 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제11항에 있어서, 상기 세포외기질은 피브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin) 및 콜라겐 타입 IV(collagen type IV)로 이루어진 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 심장줄기세포에서 생성되어 분비되는 인터루킨(interleukin; IL)-6, IL-10 또는 형질전환 성장인자(transforming growth factor-β; TGF-β)의 항염증인자를 피브린 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 심장줄기세포에서 생성되어 분비되는 IL-6, IL-11, 카디오트로핀-1(cardiotrophin-1), 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor; HGF), 인슐린-유사 성장인자(insulin-like growth factor; IGF)-1 또는 백혈병 억제 인자(leukemia inhibitory factor; LIF)의 심근세포보호인자를 피브린 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 심장줄기세포에서 생성되어 분비되는 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor; FGF), 골 형성 단백질(bone morphogenetic protein; BMP) 또는 Sox-17의 심근재생인자를 피브린 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 심장줄기세포에서 생성되어 분비되는 안지오포이에틴(angiopoietin) 계열, 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor; FGF) 계열, 간세포 성장인자(hepatocyte growth factor; HGF) 계열 또는 혈관 내피 성장인자(vascular endothelial growth factor; VEGF)의 신생혈관유도인자를 피브린 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (4) 단계의 부유배양조건은 세포-매개 하이드로젤 수축을 유도하여, 하이드로젤 내 수분을 방출시키는 것을 특징으로 하는 심장줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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2 × 106/ml 내지 5 × 106/ml 밀도의 심장줄기세포가 함입된 최종 농도 0
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제19항에 따른 심장줄기세포의 다층세포시트 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 허혈성 심장질환, 일차성(특발성) 심근질환 및 이차성 심근질환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 심장질환 치료용 약학 조성물
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제24항에 있어서, 상기 조성물은 심장 손상 후 유발되는 심근의 섬유화(fibrosis) 정도를 감소시키고, 혈관생성 및 심근재생을 향상시키며, 심근 두께를 증가시켜, 심장수축기능을 향진시키는 것을 특징으로 하는 허혈성 심장질환, 일차성(특발성) 심근질환 및 이차성 심근질환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 심장질환 치료용 약학 조성물
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제24항에 있어서, 상기 일차성(특발성) 심근질환은 확장형 심근병증(dilated cardiomyopathy; DCM), 비후형 심근병증(hypertrophic cardiomyopathy; HCM) 또는 제한성 심근병증(restrictive cardiomyopathy)인 것을 특징으로 하는 허혈성 심장질환, 일차성(특발성) 심근질환 및 이차성 심근질환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 심장질환 치료용 약학 조성물
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