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(1) 신경능선줄기세포(neural crest stem cells, NCSCs)를 분리하여 배양하는 단계;(2) 상기 배양된 신경능선줄기세포를 최종 농도 0
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제1항에 있어서, 상기 신경능선줄기세포는 말초신경(peripheral nerve, PN)으로부터 분리된 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (2) 단계는 배양된 신경능선줄기세포를 용액 상태의 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤에 혼합한 후, 젤 상태로 전환시켜 신경능선줄기세포를 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내에 3차원적으로 균일하게 분포시키는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (2) 단계의 배양된 신경능선줄기세포는 트롬빈 및 콜라겐 혼합용액에 첨가된 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (2) 단계의 배양된 신경능선줄기세포는 1 × 106/ml 내지 1 × 108/ml의 밀도인 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 물리적 지지가 유지되는 부착배양조건은 신경능선줄기세포가 함입된 하이드로젤을 원형, 직사각형, 혹은 정사각형 형태의 몰드 내로 캐스팅(casting)하여 물리적으로 지지되는 조건에서 배양하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건은 세포-세포 간 접합과 세포-하이드로젤 고분자 간 접합을 유도하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 신경능선줄기세포에서 생성되어 분비되는 세포외기질 (extracellular matrix, ECM)을 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제10항에 있어서, 상기 세포외기질은 피브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin) 및 콜라겐 타입 IV(collagen type IV)로 이루어진 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 신경능선줄기세포에서 생성되어 분비되는 안지오포이에틴(angiopoietin; ANGPT)-1, 안지오포이에틴-2, 안지오포이에틴-3 및 안지오포이에틴-4로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 안지오포이에틴 계열, 혈관내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor; VEGF) 또는 혈소판-유래 성장인자(platelet-derived growth factor; PDGF)의 혈관성장인자를 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 신경능선줄기세포에서 생성되어 분비되는 인터루킨(interleukin; IL)-6, IL-10 또는 형질전환 성장인자(transforming growth factor-β; TGF-β)의 항염증인자를 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 신경능선줄기세포에서 생성되어 분비되는 신경 성장 인자(nerve growth factor; NGF), 뇌-유래 성장인자(brain-derived growth factor; BDNF), 뉴트로핀-3(neurotrophin-3; NT-3) 및 NT-4/5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 뉴트로핀 계열; 신경교세포주-유래 신경영양인자(glial cell line-derived neurotrophic factor; GDNF) 또는 아테민(artemin; ARTN)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 GDNF 계열; 에프린(ephrin; EFN) A1, 에프린 A2, 에프린 A4, 에프린 A5, 에프린 B1, 에프린 B2 및 에프린 B3로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 에프린 계열; 섬모 신경 영양 인자(ciliary neurotrophic factor; CNTF), 백혈병 억제 인자(leukemia inhibitory factor; LIF) 및 IL-6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 CNTF 계열; 아교세포 성숙인자(glial maturation factor; GMF); 뉴레귤린(neuregulin; NRG) 또는 인슐린-유사 성장인자(insulin-like growth factor; IGF)-1의 신경활성인자를 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (3) 단계의 부착배양조건에서의 배양은 신경능선줄기세포에서 생성되어 분비되는 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor; FGF)-7, FGF-9, FGF-16, FGF-19, FGF-12, FGF-5, FGF-6 및 FGF-14로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 FGF 계열의 신경보호인자 또는 성장인자를 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤 내로 축적하는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (4) 단계의 부유배양조건은 세포-매개 하이드로젤 수축을 유도하여, 하이드로젤 내 수분을 방출시키는 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 신경능선줄기세포의 다층세포시트는 10층 내지 50층으로 이루어진 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트 제조방법
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신경능선줄기세포가 함입된 콜라겐 및 피브리노겐 혼합 하이드로젤, 상기 신경능선줄기세포에서 분비되어 축적된 세포외기질; 안지오포이에틴(angiopoietin; ANGPT)-1, 안지오포이에틴-2, 안지오포이에틴-3 및 안지오포이에틴-4로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 안지오포이에틴 계열, 혈관내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor; VEGF) 또는 혈소판-유래 성장인자(platelet-derived growth factor; PDGF)의 혈관성장인자; 인터루킨(interleukin; IL)-6, IL-10 또는 형질전환 성장인자(transforming growth factor-β; TGF-β)의 항염증인자; 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor; FGF)-7, FGF-9, FGF-16, FGF-19, FGF-12, FGF-5, FGF-6 및 FGF-14로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 FGF 계열의 신경보호인자 또는 성장인자 및 신경 성장 인자(nerve growth factor; NGF), 뇌-유래 성장인자(brain-derived growth factor; BDNF), 뉴트로핀-3(neurotrophin-3; NT-3) 및 NT-4/5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 뉴트로핀 계열; 신경교세포주-유래 신경영양인자(glial cell line-derived neurotrophic factor; GDNF) 또는 아테민(artemin; ARTN)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 GDNF 계열; 에프린(ephrin; EFN) A1, 에프린 A2, 에프린 A4, 에프린 A5, 에프린 B1, 에프린 B2 및 에프린 B3로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 에프린 계열; 섬모 신경 영양 인자(ciliary neurotrophic factor; CNTF), 백혈병 억제 인자(leukemia inhibitory factor; LIF) 및 IL-6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 CNTF 계열; 아교세포 성숙인자(glial maturation factor; GMF); 뉴레귤린(neuregulin; NRG) 또는 인슐린-유사 성장인자(insulin-like growth factor; IGF)-1의 신경활성인자를 포함하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트
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제18항에 있어서, 상기 신경능선줄기세포는 1 × 106/ml 내지 1 × 108/ml의 밀도인 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트
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제18항에 있어서, 상기 신경능선줄기세포의 다층세포시트는 10층 내지 50층으로 이루어진 것을 특징으로 하는 신경능선줄기세포의 다층세포시트
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제18항에 따른 신경능선줄기세포의 다층세포시트 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 척수 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제22항에 있어서, 상기 조성물은 손상된 신경 내 축색(axon) 및 수초(myelin) 생성을 증진시키는 것을 특징으로 하는 척수 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제22항에 있어서, 상기 조성물은 손상된 신경 내 염증반응을 억제시키는 것을 특징으로 하는 척수 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제22항에 있어서, 상기 조성물은 손상된 신경 내 혈관생성을 증진시키는 것을 특징으로 하는 척수 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제18항에 따른 신경능선줄기세포의 다층세포시트 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 뇌 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제26항에 있어서, 상기 조성물은 신경세포 손상을 억제하고, 신경세포 성장 및 분화를 촉진하는 것을 특징으로 하는 뇌 손상 질환 치료용 약학 조성물
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제18항에 따른 신경능선줄기세포의 다층세포시트 또는 이의 배양물을 유효성분으로 포함하는 말초신경 손상 질환 치료용 약학 조성물
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