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BMP2 및 TGFβ3 발현 미니서클벡터를 이용하여 분화 유도된 연골세포

  • 기술번호 : KST2018010518
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 성장 인자를 암호화하는 미니서클벡터를 형질도입하여 유도만능줄기세포(iPSC)로부터 분화된 연골세포 펠렛(chondrogenic pellet) 및 이의 용도에 관한 것이다. 상기 연골세포 펠렛은 연골세포의 마커 유전자를 유의적으로 발현하면서, 재조합 성장 인자를 첨가한 배지에서 분화 유도된 연골세포에 비해 연골세포의 마커 유전자를 보다 높은 수준으로 발현할 수 있다. 상기 연골세포 펠렛을 생체 내의 연골 손상 부위에 이식하였을 때, 분화된 연골세포에 의해 연골의 재생이 효과적으로 나타날 수 있으며, 이는 재조합 성장 인자를 첨가하여 분화 유도한 연골세포를 이식하는 경우보다 효과적인 연골 재생능을 나타낼 수 있어, 연골 재생을 위한 조직 공학 치료 방법에 유용하게 사용할 수 있다.
Int. CL C12N 15/85 (2006.01.01) C12N 5/077 (2010.01.01) C07K 14/495 (2006.01.01) C07K 14/51 (2006.01.01)
CPC
출원번호/일자 1020180007041 (2018.01.19)
출원인 가톨릭대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-2035411-0000 (2019.10.16)
공개번호/일자 10-2018-0085698 (2018.07.27) 문서열기
공고번호/일자 (20191022) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020170009015   |   2017.01.19
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.01.19)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 가톨릭대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서초구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 주지현 서울특별시 서초구
2 남유준 경기도 부천시 은성로**번길 **
3 임예리 서울특별시 광진구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인이룸리온 대한민국 서울특별시 서초구 사평대로 ***, *층 (반포동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 가톨릭대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서초구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2018.01.19 수리 (Accepted) 1-1-2018-0066285-44
2 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2019.02.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0112650-12
3 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2019.04.15 수리 (Accepted) 1-1-2019-0385728-52
4 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2019.04.15 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-0385729-08
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2019.08.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0608080-31
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2019.10.10 수리 (Accepted) 1-1-2019-1033533-79
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2019.10.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-1033534-14
8 등록결정서
Decision to grant		 2019.10.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0744434-57
9 [출원서 등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2019.10.24 수리 (Accepted) 1-1-2019-1089157-50
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.11.21 수리 (Accepted) 4-1-2019-5245084-94
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번호 청구항
1 1
i) 유도만능줄기세포(induced pluripotent stem cell, iPSC)를 배양하여 배아체(embryoid body, EB)를 형성(generation)하는 단계;ii) 상기 단계 i)에서 형성한 EB를 젤라틴 코팅 배지에서 배양하여 돌기성장 세포(outgrowth cell, OG)를 수득하는 단계;iii) 상기 단계 ii)에서 수득한 OG 세포를, BMP2를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터 또는 TGFβ3를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터 중 어느 하나 또는 둘 다로, 형질도입(transduction)하는 단계;iv) 상기 단계 iii)에서 형질도입한 OG 세포를 연골세포로 분화 유도하는 단계; 및v) 상기 단계 iv)에서 분화 유도한 연골세포를 수득하는 단계;로 이루어지고,상기 BMP2를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터는 (a) CMV 프로모터, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 BMP2 유전자, 및 SV40 폴리아데닐화 서열을 포함하는 유전자 발현 카세트를 포함하고;(b) 상기 (a)의 유전자 발현 카세트 외부에 위치하는, 박테리오파지 람다의 att 부착 서열을 포함하며; 및(c) 복제 개시점 및 항생제 내성 유전자를 포함하지 않는 비-바이러스성 벡터이고,상기 TGFβ3를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터는 (a) CMV 프로모터, 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 TGFβ3 유전자, 및 SV40 폴리아데닐화 서열을 포함하는 유전자 발현 카세트를 포함하고;(b) 상기 (a)의 유전자 발현 카세트 외부에 위치하는, 박테리오파지 람다의 att 부착 서열을 포함하며; 및(c) 복제 개시점 및 항생제 내성 유전자를 포함하지 않는 비-바이러스성 벡터인 것을 특징으로 하는, 줄기 세포로부터 분화 유도된 연골세포의 제조방법
2 2
i) iPSC를 배양하여 EB를 형성하는 단계;ii) 상기 단계 i)에서 형성한 EB를 젤라틴 코팅 배지에서 배양하여 OG를 수득하는 단계;iii) 상기 단계 ii)에서 수득한 OG 세포를 BMP2를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터로 형질도입하는 단계;iv) 상기 단계 ii)에서 수득한 OG 세포를 TGFβ3를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터로 형질도입하는 단계;v) 상기 단계 iii)에서 형질도입한 OG 세포 및 상기 단계 iv)에서 형질도입한 OG 세포를 혼합 배양하여 연골세포로 분화 유도하는 단계; 및vi) 상기 단계 v)에서 분화 유도한 연골세포를 수득하는 단계;로 이루어지고,상기 BMP2를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터는 (a) CMV 프로모터, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 BMP2 유전자, 및 SV40 폴리아데닐화 서열을 포함하는 유전자 발현 카세트를 포함하고;(b) 상기 (a)의 유전자 발현 카세트 외부에 위치하는, 박테리오파지 람다의 att 부착 서열을 포함하며; 및(c) 복제 개시점 및 항생제 내성 유전자를 포함하지 않는 비-바이러스성 벡터인 것인, 줄기 세포로부터 분화 유도된 연골세포의 제조방법
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삭제
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i) iPSC를 배양하여 EB를 형성하는 단계;ii) 상기 단계 i)에서 형성한 EB를 젤라틴 코팅 배지에서 배양하여 OG를 수득하는 단계;iii) 상기 단계 ii)에서 수득한 OG 세포를 BMP2를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터로 형질도입하는 단계;iv) 상기 단계 ii)에서 수득한 OG 세포를 TGFβ3를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터로 형질도입하는 단계;v) 상기 단계 iii)에서 형질도입한 OG 세포 및 상기 단계 iv)에서 형질도입한 OG 세포를 혼합 배양하여 연골세포로 분화 유도하는 단계; 및vi) 상기 단계 v)에서 분화 유도한 연골세포를 수득하는 단계;로 이루어지고,상기 TGFβ3를 암호화하는 염기서열을 포함하는 미니서클벡터는 (a) CMV 프로모터, 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 TGFβ3 유전자, 및 SV40 폴리아데닐화 서열을 포함하는 유전자 발현 카세트를 포함하고;(b) 상기 (a)의 유전자 발현 카세트 외부에 위치하는, 박테리오파지 람다의 att 부착 서열을 포함하며; 및(c) 복제 개시점 및 항생제 내성 유전자를 포함하지 않는 비-바이러스성 벡터인 것을 특징으로 하는, 줄기 세포로부터 분화 유도된 연골세포의 제조방법
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제 1항, 제 2항, 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 연골세포로 분화 유도하는 단계는 재조합 성장인자를 포함하지 않는 배지에서 3 내지 30 일 동안 배양하여 수행하는 것을 특징으로 하는, 줄기 세포로부터 분화 유도된 연골세포의 제조방법
6 6
제 1항, 제 2항, 제 4항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 연골세포
7 7
제 6항의 연골세포를 유효성분으로 포함하는, 연골 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
8 8
제 7항에 있어서, 상기 연골 손상 질환은 퇴행성 관절염, 류마티스성 관절염, 골절, 족저근막염, 상완골외과염, 석회화근염, 골절의 불유합, 또는 외상에 의한 관절손상인 것을 특징으로 하는, 연골 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN110300798 CN 중국 FAMILY
2 KR102014020 KR 대한민국 FAMILY
3 WO2018135902 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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1 CN110300798 CN 중국 DOCDBFAMILY
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 보건복지부 가톨릭대학교 산학협력단 첨단의료기술개발/(줄기세포.재생의료)성과창출형 중개연구 유도만능 줄기세포 유래 주사용 연골세포 microbeads 골관절염 치료제 개발
2 보건복지부 가톨릭대학교 산학협력단 첨단의료기술개발 유도만능줄기세포 유래 주사주입이 가능한 유리연골 스페로이드 개발
3 오송첨단의료산업진흥재단 가톨릭대학교 산학협력단 첨단의료복합단지 기반기술구축 류마티스 관절염 치료제 개발을 위한 영장류, 설치류 동물모델 유효성 평가 플랫폼 확립 및 평가 서비스 지원