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서열번호 2로 기재되는 염기서열로 이루어진 전방향 프라이머(forward primer)와 서열번호 3로 기재되는 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머(reverse primer)를 포함하는 프라이머 세트; 및서열번호 6으로 기재되는 염기서열로 이루어진 전방향 프라이머(forward primer)와 서열번호 7로 기재되는 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머(reverse primer)를 포함하는 프라이머 세트;를 포함하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 프라이머 세트
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서열번호 4로 기재되는 염기서열로 이루어지는 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 및 서열번호 8로 기재되는 염기서열로 이루어지는 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브를 포함하며,상기 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브 및 상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브에서 염기서열의 5' 말단에 형광발색제(fluorescent reporter dye)가 표지되고 3' 말단에는 소광제(quencher)가 표지된 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브
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3 |
3
제2항에 있어서,상기 형광발색제는,상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브인 경우에 FAM(carboxyfluorescein)이고,상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브인 경우에 JOE(2,7-dimethoxy-4,5-dichloro-6-carboxyfluoroscein) 또는 VIC인 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브
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4 |
4
제2항에 있어서,상기 소광제는 MGB(minor-groove binding), BHQ-1(Black Hole Quencher 1), BHQ-2(Black Hole Quencher 2), BHQ-3(Black Hole Quencher 3), TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine), DDQ1(deep dark Quencher 1), 및 DDQ2(deep dark Quencher 2)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브
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5
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,상기 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브는, 상기 서열번호 4로 기재되는 염기서열의 5'-말단 부분에 형광발색제인 FAM(carboxyfluorescein)가 표지되고 3'-말단 부분에 소광제인 TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브
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제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브는, 상기 서열번호 8로 기재되는 염기서열의 5'-말단 부분에 형광발색제인 JOE(2,7-dimethoxy-4,5-dichloro-6-carboxyfluoroscein) 또는 VIC가 표지되고, 3'-말단 부분에는 소광제인 TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브
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11
(a) 대상 시료부터 전장 RNA를 분리하는 단계;(b) 분리된 전장 RNA로부터 cDNA를 합성하는 단계;(c) 합성된 cDNA에 특이적으로 한탄바이러스를 증폭할 수 있는 서열번호 2와 서열번호 3의 염기서열로 구성되는 한탄바이러스 검출용 프라이머 세트와 서열번호 4의 염기서열로 구성된 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브, 및 특이적으로 서울바이러스를 증폭할 수 있는 서열번호 6과 서열번호 7의 염기서열로 구성되는 서울바이러스 검출용 프라이머 세트와 서열번호 8의 염기서열로 구성된 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브를 이용하여 TaqMan 실시간 중합효소연쇄반응법(TaqMan real-time PCR)을 수행하는 단계; 및(d) 상기 TaqMan 실시간 중합효소연쇄반응법(TaqMan real-time PCR)을 수행하는 단계의 증폭 산물의 유무 및 증폭 산물의 양을 비교하여 한탄바이러스 및 서울바이러스를 검출 및 정량하는 단계;를 포함하며,상기 (d) 단계는,농도별로 희석한 한탄바이러스 및 서울바이러스의 표준 정량 시료를 이용하여 수행한 TaqMan 실시간 중합효소연쇄반응법(TaqMan real-time PCR)의 증폭 산물의 양을 측정하여 표준 곡선(standard curve)을 산출하는 단계; 및시료로부터 수득한 RNA를 대상으로 수행한 TaqMan 실시간 중합효소연쇄반응법(TaqMan real-time PCR) 산물의 양을 산출된 표준 곡선에 도입하여 한탄바이러스 및 서울바이러스를 정량하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스의 분석 방법
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12
제11항에 있어서,상기 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브는, 상기 서열번호 4의 염기서열의 5'-말단 부분에 형광발색제인 FAM(carboxyfluorescein)가 표지되고 3'-말단 부분에 소광제인 TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되고,상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브는, 상기 서열번호 8의 염기서열의 5'-말단 부분에 형광발색제인 JOE(2,7-dimethoxy-4,5-dichloro-6-carboxyfluoroscein) 또는 VIC가 표지되고, 3'-말단 부분에는 소광제인 TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는 신증후군출혈열을 일으키는 한탄바이러스 및 서울바이러스의 분석 방법
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