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(i) 소 게놈 DNA의 베타-카제인 암호화 영역의 엑손 7의 일부를 포함하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 3'-아암(arm);(ii) 상기 3'-아암의 3'-말단에 연결된 제브라피시 티로시나아제(zebrafish tyrosinase) 서열 일부로 구성된 폴리뉴클레오티드;(iii) 소 게놈 DNA의 베타-카제인 암호화 영역의 엑손 7 일부를 포함하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 5'-아암(arm);(iv) 상기 5'-아암과 프레임에 맞게 연결된 F2A 및 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드; 및 (v) 선별 마커;를 포함하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 3'-아암은 서열번호 1의 핵산서열을 갖는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 5'-아암은 서열번호 2의 핵산서열을 갖는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 치료용 단백질을 암호화하는 유전자는 소 락토페린(bovine lactoferrin) 유전자인 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 4항에 있어서,상기 소 락토페린 유전자는 서열번호 3의 핵산서열을 갖는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 치료용 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 3'-말단에 소 성장 호르몬(bovine growth hormone; BGH) polyA 폴리뉴클레오티드가 추가로 연결되는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 6항에 있어서,상기 소 성장 호르몬 polyA 폴리뉴클레오티드는 서열번호 4의 핵산서열을 갖는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 제브라피시 티로시나아제 서열 일부로 구성된 폴리뉴클레오티드는 sgRNA(single guide RNA)가 베타-카제인 암호화 영역의 엑손 7을 특정하여 타겟팅하는 핵산서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 선별 마커는 양성 선별 마커(positive selectable marker), 음성 선별 마커(negative selectable marker) 또는 그 조합인 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 9항에 있어서,상기 양성 선별 마커는 EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein) 유전자인 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 선별 마커의 5'-말단 및 3'-말단에 각각 poyA 폴리뉴클레오티드가 연결되고, 5'-말단의 poyA 폴리뉴클레오티드가 상기 치료용 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드와 연결되는 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 3'-아암의 엑손 7의 일부는 20 내지 60 bp의 길이인 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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제 1항에 있어서,상기 5'-아암의 엑손 7의 일부는 60 내지 130 bp의 길이인 것을 특징으로 하는 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터
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(i) 제 1항 내지 제13항으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 한 항의 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터와 크리스퍼 유전자가위(CRISPR/Cas9)를 소의 체세포 내로 미세주입하여 형질전환하는 단계;(ii) 상기 (i)의 소의 체세포 및 전핵기 소 수정란 중 베타-카제인을 암호화하는 게놈 DNA 상에 상기 넉-인 벡터에 포함되어 있는 유전자 컨스트럭트가 제대로 넉-인된 형질전환 소 체세포 및 수정란을 선별하는 단계;(iii) 상기 소의 체세포의 핵을 소 난자의 핵과 치환하여, 핵치환 난자를 제조하는 소 난자 핵치환 단계;(iv) 상기 핵치환 난자를 발생시켜 넉-인 소를 제조하는 형질전환 넉-인 소 제조 단계; 및(v) 상기 넉-인 소 중 암소를 사육하여, 상기 치료용 단백질을 분리하는 단계;를 포함하는 형질전환 넉-인 소로부터 치료용 단백질의 생산방법
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제 14항에 있어서,상기 (i)의 미세주입 단계는,a) 소 게놈 DNA의 베타-카제인 암호화 영역의 엑손 7의 일부를 포함하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 3'-아암(arm);b) 상기 3'-아암의 3'-말단에 연결된 제브라피시 티로시나아제(zebrafish tyrosinase) 서열 일부로 구성된 폴리뉴클레오티드;c) 소 게놈 DNA의 베타-카제인 암호화 영역의 엑손 7 일부를 포함하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 5'-아암(arm);d) 상기 5'-아암과 프레임에 맞게 연결된 F2A 및 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드; 및 e) 선별 마커;로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 포함하는 넉-인 벡터와 상기 크리스퍼 유전자가위(CRISPR/Cas9)를암호화하는 폴리뉴클레오티드를 체외수정 유도 후 제2 극체가 확인된 수정란의 전핵에 미세주입함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 넉-인 소로부터 치료용 단백질의 생산방법
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소의 난자의 핵을 제 14항의 형질전환 소 체세포의 핵으로 치환시켜 제조된 핵치환 난자를 발생시켜 태어난, 치료용 단백질을 우유로 분비하는 형질전환 복제소
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제 1항 내지 제13항으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 한 항의 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터를 포함하는, 치료용 단백질 유전자를 쉽게 삽입할 수 있는 넉-인 벡터 제조 키트
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제 1항 내지 제13항으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 한 항의 치료용 단백질 생산용 넉-인 벡터 및 크리스퍼 유전자 가위(CRISPR/Cas9)를 포함하는, 치료용 단백질 생산용 세포 및 수정란 생산 키트
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