| 1 |
1
다음의 단계를 포함하는 다중체(multimer)인 목적단백질 디스플레이 시스템의 제조 방법:(a)(i) 디스플레이하고자 하는 목적단백질의 단량체(monomer) 및 앵커(anchor) 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 및 (ii) 상기 코딩 뉴클레오타이드 서열에 작동적(operatively)으로 결합된 프로모터를 포함하는 벡터를 구축(construction)하는 단계; (b) 상기 벡터로 미생물을 형질전환(transformation)시키는 단계; (c) 상기 형질전환된 미생물을 배양하여 앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체를 발현시키는 단계로서, 상기 앵커 폴리펩타이드는 미생물의 내막에 앵커링(anchoring)되고 목적단백질의 단량체는 상기 미생물의 원형질막 주위 공간(periplasmic region)에 전시되는 단계; 및 (d) 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체는 세포막의 유동성(membrane fluidity)에 의해 자가-조립(self-assemble)되어 다중체(multimer)를 형성하는 단계
|
| 2 |
2
제 1 항에 있어서, 상기 목적단백질은 이량체(dimder)를 포함하는 다중체(multimer) 형태인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 3 |
3
제 2 항에 있어서, 상기 목적단백질은 항체, 항체 항원 결합영역 (VH 또는 VL), scFv, Fab, Fc 단백질, G-단백질, 헤모글로빈, M-CSF, CD28, 인터류킨, 인터페론-γ, TGF-β 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 4 |
4
제 1 항에 있어서, 상기 목적단백질의 단량체는 Fc 단백질 단량체 또는 이의 단편인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 5 |
5
제 1 항에 있어서, 상기 목적단백질의 단량체는 항체의 중쇄 가변부위(VH), 경쇄 가변부위(VL) 및 이의 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 2 이상의 단량체인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 6 |
6
제 1 항에 있어서, 상기 앵커 폴리펩타이드는 gIII 단백질, NlpA 리더 펩타이드, MalF, Pf3 코트 단백질, M13 프로코트 단백질, ProW Nt/TM1/3K 및 KdpD 단백질로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 7 |
7
제 1 항에 있어서, 상기 미생물은 세균세포인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 8 |
8
삭제
|
| 9 |
9
앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체, 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체를 코딩하는 핵산분자 또는 상기 핵산분자를 포함하는 벡터를 포함하는 목적단백질 디스플레이용 조성물로서, 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체는 제 1 항의 방법으로 제조되어 미생물 세포막의 유동성(membrane fluidity)에 의해 자가-조립(self-assemble)되어 다중체(multimer)를 형성하여 상기 미생물의 원형질막 주위 공간(periplasmic region)에 전시되는 것을 특징으로 하는 목적단백질 디스플레이용 조성물
|
| 10 |
10
제 9 항에 있어서, 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 목적단백질의 단량체는 서열목록 제35서열 내지 제39서열로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 11 |
11
제 9 항에 있어서, 상기 핵산분자는 서열목록 제30서열 내지 제34서열로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 12 |
12
다음의 단계를 포함하는 FcγR에 대한 친화도가 향상된 Fc 변이체의 선별방법:(a) (i) 디스플레이하고자 하는 Fc 변이체의 단량체(monomer) 및 앵커(anchor) 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 및 (ii) 상기 코딩 뉴클레오타이드 서열에 작동적(operatively)으로 결합된 프로모터를 포함하는 벡터를 구축(construction)하는 단계; (b) 상기 벡터로 미생물을 형질전환(transformation)시키는 단계; (c) 상기 형질전환된 미생물을 배양하여 앵커 폴리펩타이드가 융합된 Fc 변이체의 단량체를 발현시키는 단계로서, 상기 앵커 폴리펩타이드는 미생물의 내막에 앵커링(anchoring)되고 Fc 변이체의 단량체는 상기 미생물의 원형질막 주위 공간(periplasmic region)에 전시되는 단계; (d) 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 Fc 변이체의 단량체는 세포막의 유동성(membrane fluidity)에 의해 자가-조립(self-assemble)되어 이량체(dimer)를 형성하는 단계; 및(e) 상기 Fc 변이체의 이량체가 디스플레이된 미생물에 FcγR를 처리한 후, FcγR에 대한 결합력을 야생형(wild type) Fc의 경우와 비교하는 단계
|
| 13 |
13
제 12 항에 있어서, 상기 Fc 변이체는 카밧 넘버링 시스템(Kabat numbering system)에 따른 하기의 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 2 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 선별방법: L235V, G236A, S239D, F243L, V264E, S267E, R292P, Q295R, S298G, T299A, Y300L, K326I, A327Y, L328F, L328G, L328W, A330L, P331A, I332E, I332Y, T350A, D357G, E382V, N390D, T394A, P396L, F405S, M428I 및 M428L
|
| 14 |
14
다음의 단계를 포함하는 항원에 대한 결합력을 갖는 VH 또는 VL 중 선택되는 항원 결합 영역의 선별방법:(a) (i) 디스플레이하고자 하는 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변부위와 앵커(anchor) 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 및 (ii) 상기 코딩 뉴클레오타이드 서열에 작동적(operatively)으로 결합된 프로모터를 포함하는 벡터를 구축(construction)하는 단계; (b) 상기 벡터로 미생물을 형질전환(transformation)시키는 단계; (c) 상기 형질전환된 미생물을 배양하여 앵커 폴리펩타이드가 융합된 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변부위를 발현시키는 단계로서, 상기 앵커 폴리펩타이드는 미생물의 내막에 앵커링(anchoring)되고 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변부위는 상기 미생물의 원형질막 주위 공간(periplasmic region)에 전시되는 단계; (d) 상기 앵커 폴리펩타이드가 융합된 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변부위는 세포막의 유동성(membrane fluidity)에 의해 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변부위와 자가-조립(self-assemble)되어 다중체(multimer)를 형성하는 단계; 및(e) 상기 다중체가 디스플레이된 미생물에 항원을 처리하는 단계
|
| 15 |
15
제 14 항에 있어서, 상기 항체의 중쇄 가변부위를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 및 경쇄 가변부위를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 동일한 벡터에 구축되거나, 서로 다른 벡터에 구축되는 것을 특징으로 하는 선별방법
|
