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5'-아암(arm)으로서, 서열번호 3으로 기재되는 핵산서열로 구성되며 소 베타-카제인 게놈 DNA의 프로모터, 엑손 7의 일부를 포함하는 5'-말단 단편; 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 유전자; 및3'-아암(arm)으로서, 서열번호 6으로 기재되는 핵산서열로 구성되며 소 베타-카제인 게놈 DNA의 엑손 7 및 8 사이의 인트론 부분을 포함하는, 소 베타-카제인 게놈 DNA 넉-인 벡터
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제1항에 있어서,상기 치료용 단백질은 소 락토페린(bovine lactoferrin)인, 넉-인 벡터
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제2항에 있어서,상기 소 락토페린을 코딩하는 유전자는 서열번호 7로 기재되는 핵산서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드인, 넉-인 벡터
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제2항에 있어서,상기 소 락토페린을 코딩하는 유전자의 3' 말단에 polyA 신호가 추가로 연결된, 넉-인 벡터
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제2항에 있어서, 상기 소 락토페린을 코딩하는 유전자의 3' 말단에 융합 형광 단백질의 발현을 확인하기 위한 리포터 유전자(reporter gene)가 추가로 연결된, 넉-인 벡터
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제5항에 있어서, 상기 형광단백질은 녹색형광단백질(green fluorescent protein, GFP), 황색형광단백질(yellow fluorescent protein, YFP), 적색형광단백질(red fluorescent protein, RFP), 주황형광단백질(orange fluorescent protein, OFP), 청록색형광단백질(cyan fluorescent protein, CFP), 청색형광단백질(blue fluorescent protein, BFP) 또는 원적색형광단백질(far-red fluorescent protein)인, 넉-인 벡터
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7
제1항에 있어서, 양성 선별마커(positive selectable marker) 또는 음성 선별마커(negative selectable marker)를 포함하는, 넉-인 벡터
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제7항에 있어서,상기 양성 선별마커는 네오(neo) 유전자, 퓨로마이신(puromycin) 저항성 유전자 또는 지오신(zeocin) 저항성 유전자인, 넉-인 벡터
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제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 넉-인 벡터;소 베타-카제인 게놈 DNA 엑손 7 표적용 sgRNA;상기 넉-인 벡터의 5'-아암 표적용 sgRNA;상기 넉-인 벡터의 3'-아암 표적용 sgRNA; 및Cas9 또는 상기 Cas9을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 소 베타-카제인 게놈 DNA 넉-인용 조성물
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제9항에 있어서,상기 소 베타-카제인 게놈 DNA 엑손 7 표적용 sgRNA는 서열번호 35로 기재되는 핵산서열을 표적으로 하는, 조성물
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제9항에 있어서,상기 넉-인 벡터의 5'-아암 표적용 sgRNA 서열번호 36으로 기재되는 핵산서열을 표적으로 하는, 조성물
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제9항에 있어서,상기 넉-인 벡터의 3'-아암 표적용 sgRNA 서열번호 37로 기재되는 핵산서열을 표적으로 하는, 조성물
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제9항에 있어서,bRAD51 단백질 또는 상기 bRAD51 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함하는, 소 베타-카제인 게놈 DNA 넉-인용 조성물
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제9항의 소 베타-카제인 게놈 DNA 넉-인용 조성물을 소의 수정란에 미세주입하는 미세주입단계;상기 미세주입한 수정란을 배반포기까지 배양하는 배양단계;상기 배반포기 수정란의 DNA를 추출하여 PCR로 증폭하는 증폭단계; 및상기 증폭된 PCR 산물의 유무 및 크기를 판별하여 상기 벡터가 소 베타-카제인 게놈 DNA의 제 위치로 삽입된 것을 확인하는, 소의 수정란에서의 베타-카제인 게놈 DNA로의 치료용 단백질을 암호화하는 유전자의 넉-인 방법
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제9항의 소 베타-카제인 게놈 DNA 넉-인용 조성물로 소 수정란의 핵 내 베타-카제인 게놈 DNA를 넉-인시킨 유전자 재조합 소 수정란으로부터 발생시킨, 치료용 단백질의 대량생산용 형질전환 소
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