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편집하고자 하는 표적 서열, Cas9(CRISPR associated protein 9), Cpf1(CRISPR from Prevotella and Francisella 1), TALEN(Transcription activator-like effector nuclease) 및 ZFN(Zinc Finger Nuclease)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 핵산가수분해효소 코딩 서열 및 상기 핵산가수분해효소를 편집하고자 하는 표적 서열로 유도할 수 있는 가이드 RNA 코딩 서열을 포함하고, Rep/RepA 코딩 서열, LIR1, LIR2 및 LIR3의 3개의 LIR(large intergenic region) 및 각 LIR에 대한 터미네이터 서열을 갖는 게미니바이러스(geminivirus) 기반 다중 레플리콘(multiple replicon)을 탑재한 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하여 조직배양하는 단계;를 포함하는, 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법으로서,상기 편집하고자 하는 표적 서열; 핵산가수분해효소 코딩 서열 및 가이드 RNA 코딩 서열; 및 Rep/RepA 코딩 서열; 중 어느 하나가 각 LIR과 터미네이터 서열 사이에 하나씩 위치하여 형질전환된 식물세포 내에서 3개의 레플리콘으로 분리되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,편집하고자 하는 표적 서열, Cas9(CRISPR associated protein 9), Cpf1(CRISPR from Prevotella and Francisella 1), TALEN(Transcription activator-like effector nuclease) 및 ZFN(Zinc Finger Nuclease)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 핵산가수분해효소 코딩 서열 및 상기 핵산가수분해효소를 편집하고자 하는 표적 서열로 유도할 수 있는 가이드 RNA 코딩 서열을 포함하고, Rep/RepA 코딩 서열, LIR1, LIR2 및 LIR3의 3개의 LIR(large intergenic region) 및 SIR1, SIR2 및 SIR3의 3개의 SIR(small intergenic region)을 갖는 게미니바이러스(geminivirus) 기반 다중 레플리콘(multiple replicon)을 탑재한 재조합 벡터로 식물세포를 형질전환하여 조직배양하는 단계;를 포함하는, 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법으로서,상기 LIR 및 SIR은 5'에서 3' 방향으로 LIR1, SIR1, SIR2, LIR2, SIR3 및 LIR3가 순서대로 위치하며,상기 편집하고자 하는 표적 서열; 핵산가수분해효소 코딩 서열 및 가이드 RNA 코딩 서열; 및 Rep/RepA 코딩 서열; 중 어느 하나가 LIR1과 SIR2 사이, LIR2와 SIR3 사이, SIR3와 LIR3 사이에 하나씩 위치하여 형질전환된 식물세포 내에서 3개의 레플리콘으로 분리되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 형질전환된 식물세포의 조직배양의 온도 조건은 식물조직의 공배양(cocultivation) 후 4~6일간은 29~33℃로 배양하고, 이후 4~6일간은 26~30℃로 배양하는 것을 특징으로 하는 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 형질전환된 식물세포의 조직배양의 광주기 조건은 6~10시간의 명기 및 14~18 시간의 암기로 이루어진 단일조건(short day)인 것을 특징으로 하는 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 조직배양된 식물 내에서 RPA1A(replication protein A), RPA1B, RPA1C, RPA1D, RAD51B(RAD51 paralog B), RAD51C, RAD51D, RAD51, DMC1(DNA Meiotic Recombinase 1), RAD52-1, RAD52-2, RAD54, XRCC1(X-Ray Repair Cross Complementing 1), XRCC2, XRCC3, ATM(ATM Serine/Threonine Kinase), XRS2/NBS(MRN/X), Mre11(MRN/X), rad50(MRN/X), Brca1(BRCA1, DNA repair associated), Brca2A, Brca2B, CtlP/Com1/Sae2 및 exo1로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 발현을 유도 또는 저해하거나 HDR 경로의 활성화제(activator)를 처리하여 HDR 경로를 활성화시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 조직배양된 식물 내에서 KU70(XRCC6), KU80(XRCC5) 및 LIG4로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 발현을 저해하거나 NHEJ 경로의 저해제를 처리하여 NHEJ 경로를 저해하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 핵산가수분해효소는 코딩 서열 내에 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 AtTrp1 (Arabidopsis thaliana telomeric repeat-binding protein) 인트론이 삽입된 것을 특징으로 하는 식물체에서 유전자 편집 효율을 증가시키는 방법
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