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서열번호 8로 표시되는 FLS(formolase) 아미노산에서 482번째 루신이 세린, 아르기닌 및 글루탐산으로 치환된 변이로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 변이를 포함하는 FLS 변이 아미노산
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제1항에 있어서, 상기 FLS는 서열번호 7로 표시되는 염기서열로 코딩되는 것을 특징으로 하는, FLS 변이 아미노산
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제1항에 있어서, 상기 FLS에서 482번째 루신이 세린으로 치환된 변이는(FLS:L482S) 서열번호 10의 아미노산으로 표시되고, 482번째 루신이 아르기닌으로 치환된 변이는(FLS:L482R) 서열번호 11의 아미노산으로 표시되며, 482번째 루신이 글루탐산으로 치환된 변이는(FLS:L482E) 서열번호 12의 아미노산으로 표시되는 것을 특징으로 하는, FLS 변이 아미노산
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4
제1항에 있어서, 상기 FLS 변이 아미노산은 396번째 트레오닌의 변이, 446번째 트레오닌의 변이, 473번째 메티오닌의 변이, 477번째 세린의 변이 및 499번째 루신의 변이로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, FLS 변이 아미노산
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5
제1항에 있어서, 상기 FLS는 슈도모나스 플루오레스센스(Pseudomonas fluorescens)로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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6
제1항의 FLS 변이 아미노산을 코딩하는 유전자
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7
서열번호 1의 염기서열로 표시되는 NOX(NADH oxidase) 유전자, 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 EtDH(ethanol dehydrogenase) 유전자, 서열번호 5의 염기서열로 표시되는 EtDH의 변이 유전자, 서열번호 7의 염기서열로 표시되는 FLS(formolase) 유전자, FLS 변이 아미노산을 코딩하는 유전자, 서열번호 13의 염기서열로 표시되는 BDH(2,3-butanediol dehydrogenase) 유전자, 서열번호 15의 염기서열로 표시되는 BDH의 변이 유전자, 서열번호 17의 염기서열로 표시되는 DDH(diol dehydratase) 유전자 및 DDH의 변이 유전자를 포함하는 재조합 벡터이고,상기 FLS 변이 아미노산을 코딩하는 유전자는 서열번호 10; 서열번호 11; 및 서열번호 12로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산을 코딩하는 유전자이며,상기 DDH의 변이 유전자는 서열번호 19; 서열번호 20; 서열번호 21; 및 서열번호 23으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산을 코딩하는 유전자를 포함하는 것인, 재조합 벡터
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8 |
8
제7항에 있어서, 상기 NOX 유전자는 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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9 |
9
제7항에 있어서, 상기 EtDH 유전자 또는 EtDH 변이유전자는 쿠프리아비두스 네카터(Cupriavidus necator)로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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10 |
10
제7항에 있어서, 상기 BDH 유전자 또는 BDH 변이유전자는 클로스트리디움 오토에타노지넘(Clostridium autoethanogenum)로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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11 |
11
제7항에 있어서, 상기 DDH(diol dehydratase) 유전자 및 DDH의 변이 유전자는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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삭제
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13
삭제
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14
제7항에 있어서, 상기 EtDH의 변이체는 서열번호 4의 아미노산 서열로 표시되는 EtDH의 46번째 아스파르트산이 글리신으로 치환되고(EtDH:D46G), 서열번호 6의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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15
삭제
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16
제7항에 있어서, 상기 BDH의 변이체는 서열번호 14의 아미노산 서열로 표시되는 BDH의 199번째 세린이 알라닌으로 치환되고(BDH:S199A), 서열번호 16의 아미노산으로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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17
삭제
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18
제7항에 있어서, 상기 DDH의 변이체는 서열번호 18의 DDH 아미노산의 302번째 세린이 알라닌으로 치환된 변이체(DDH:S302A); 337번째 글루타민이 알라닌으로 치환된 변이체(DDH:Q337A); 375번째 페닐알라닌이 이소루신으로 치환된 변이체(DDH:F375I); 으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 단일 또는 다중 변이체인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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19
제18항에 있어서, 상기 다중 변이체는 서열번호 18의 DDH 아미노산의 337번째 글루타민이 알라닌 및 375번째 페닐알라닌이 이소루신으로 치환된 변이체(DDH:Q337A/F375I); 302번째 세린이 알라닌 및 37번째 글루타민이 알라닌으로 치환된 변이체(S302A/F375I); 또는 302번째 세린이 알라닌으로, 337번째 글루타민이 알라닌으로, 375번째 페닐알라닌이 이소루신으로 치환된 변이체(S302A/Q337A/F375I)인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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20
제19항에 있어서, 상기 DDH:Q337/F375I는 서열번호 22의 염기서열 및 서열번호 23의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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제7항에 있어서, 상기 DDH 변이체는 DDH의 재활성 인자(reactivating factor)인 dhaR를 발현하는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터
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제7항의 재조합 벡터가 도입된 형질전환 미생물
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제22항의 형질전환 미생물에서 생산된 단백질을 정제하고 반응시키는 단계;를 포함하는 부탄올 생산 방법
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제23항에 있어서, 상기 부탄올은 2-부탄올, n-부탄올, 아이소부탄올(isobutanol) 및 터트-부탄올(tert-Butanol)으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 방법
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제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 무-세포(cell-free) 상태에서 제22항의 형질전환 미생물에서 생산된 단백질을 다단계 촉매 작용을 수행하여 부탄올을 생산하는 것을 특징으로 하는 방법
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제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 에탄올을 기질로 이용하는 것을 특징으로 하는 방법
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제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 조효소인 NAD+, NADP+, 비타민 B12 및 TPP(thiamine pyrophosphate)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 조효소를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 금속 이온 Mg2+, Mn2+, Ca2+, Fe2+, Ni2+, Cu2+ 및 Zn2+으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 금속 이온을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법
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제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 pH 5
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30
제23항에 있어서, 상기 생산 방법은 16 내지 45도에서 부탄올을 생산하는 것을 특징으로 하는 방법
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제22항의 형질전환 미생물에서 생산된 단백질을 나노입자에 고정하고 반응시키는 단계;를 포함하는 부탄올 생산 방법
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제31항에 있어서, 상기 나노입자는 산화 규소(silicon oxide)를 부착하고 글루타알데히드(glutaraldehyde)와 반응시키는 것을 특징으로 하는 방법
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제31항에 있어서, 상기 고정된 단백질 나노입자는 재사용이 가능한 것을 특징으로 하는 방법
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