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세포 내 NADPH-의존적 실시간 활성 대사 이미징 방법 및 그 용도

  • 기술번호 : KST2019016788
  • 담당센터 : 광주기술혁신센터
  • 전화번호 : 062-360-4654
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 세포 내 NADPH-의존적 실시간 활성 대사 이미징 방법 및 그 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 메타게놈 유래 단백질인 mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)변이체를 이용하여 세포 내 조효소의 농도 구배 및 변화의 실시간 측정이 가능한 이미징 방법 및 이의 응용 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 실시간 조효소 정량방법은 조효소인 NADP(H)를 초 단위의 실시간으로 정량할 수 있고, 기존 방법의 적용이 제한되는 저온, 산성/염기성 조건에서도 정량이 가능할 뿐만 아니라, 시료에 포함된 조효소의 농도가 낮아도 높은 감도로 정확하고 신속한 정량이 가능하다. 특히, 기존의 정량 시스템과 달리 세포의 파괴 없이 조효소 측정 또는 변환에 필요한 기질을 첨가할 필요도 없고, 형광을 발생하기 위한 특수한 구조(fluorophore) 형성에 소요되는 시간 없이, 무산소 조건에서도 짧은 시간 내에 형광을 증진함으로써 다양한 생체 시료에 포함된 조효소의 이미지화 및 정량이 가능하다. 특히 mBFP 의 내재된 효소활성을 제거하여 불순물에 따른 신호간섭이 없이 다양한 복합조성물을 지닌 생체시료에 직접 적용할 수 있는 안정적인 정량/이미지 기술을 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 NADP(H) 이미지 분석법은 다양한 숙주에서 높은 발현율을 나타냄으로, 세포 성장에 저해가 없는 리포터로 채용함으로써, 대사 과정을 실시간으로 확인 가능할 것으로 기대된다.
Int. CL C07K 14/00 (2006.01.01) C12Q 1/02 (2017.01.01) C12Q 1/26 (2006.01.01) G01N 33/68 (2006.01.01)
CPC C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01)
출원번호/일자 1020180084490 (2018.07.20)
출원인 전남대학교산학협력단
등록번호/일자 10-2012755-0000 (2019.08.14)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20190822) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.07.20)
심사청구항수 11

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 전남대학교산학협력단 대한민국 광주광역시 북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김근중 광주광역시 북구
2 김응삼 광주광역시 북구
3 김정선 광주광역시 북구
4 유성환 광주광역시 동구
5 정대은 광주광역시 북구
6 조은서 광주광역시 북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인 플러스 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***번지 (둔산동, 사학연금회관) **층

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 전남대학교산학협력단 광주광역시 북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2018.07.20 수리 (Accepted) 1-1-2018-0717630-96
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2018.09.06 수리 (Accepted) 1-1-2018-0885095-19
3 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2019.06.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0423540-04
4 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2019.07.26 수리 (Accepted) 1-1-2019-0768239-65
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2019.07.26 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-0768227-17
6 등록결정서
Decision to grant		 2019.08.09 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0576024-00
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번호 청구항
1 1
서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진, 청색 형광 단백질mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체
2 2
제 1항의 아미노산 서열을 코딩하는, 청색 형광 단백질 mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체의 유전자
3 3
제 2항의 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터
4 4
제 3항의 재조합 발현 벡터로 형질전환된, 인간을 제외한 형질전환체
5 5
제 4항에 있어서,상기 형질전환체는 미생물, 동물 세포 또는 식물세포인 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 형질전환체
6 6
제 5항에 있어서,상기 형질전환체는 대장균(Escherichia coli), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), HeLa 세포(Hela cell), 또는 캘러스 세포(callus cell)인 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 형질전환체
7 7
서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진, 청색 형광 단백질mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체를 포함하는 생체 NADP(H) 실시간 정량용 조성물
8 8
서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진, 청색 형광 단백질mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체를 NADP(H) 의존적 산화/환원 효소에 첨가하고, 형광 변화를 측정하는 단계를 포함하는 NADP(H)의 실시간 정량 방법
9 9
서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진, 청색 형광 단백질mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체를 NADP(H) 의존적 산화/환원 효소에 첨가하고, 형광 변화를 측정하는 단계를 포함하는 NADP(H) 의존적 산화/환원 효소의 정량 방법
10 10
서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진, 청색 형광 단백질mBFP(metagenome-derived blue fluorescent protein)의 변이체를 포함하는 NADP(H) 실시간 정량용 키트
11 11
제 10항에 있어서,상기 실시간은 분석이 1 내지 15초 경과시까지 이루어지는 것을 의미하는 것을 특징으로 하는 NADP(H) 실시간 정량용 키트
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US10308973 US 미국 FAMILY

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US10308973 US 미국 DOCDBFAMILY
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 전남대학교 글로벌 프론티어 연구 사업 다기능성 소재단백질 과생산 균주개발
2 해양수산부 전남대학교 해양수산생명공학기술개발 해양단백질 기반 바이오메디컬소재 개발