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PCR 프로토콜에 따라 수행된 마이크로웰 어레이를 제공하는 단계;상기 마이크로웰 어레이에 대한 적어도 2종류의 이미지를 획득하는 단계;상기 2종류의 이미지를 이용하여 각각 웰에 대한 DNA를 포함한다고 평가되는 마이크로웰의 개수인 제1 개수(N1)와 DNA를 포함하지 않는다고 평가되는 마이크로웰의 개수인 제2 개수(N2)를 산출하는 단계; 및상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 이용하여 마이크로웰 어레이의 DNA 증식 개수 또는 밀도를 측정하는 단계;를 구비하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제1항에 있어서,상기 적어도 2종류의 이미지를 획득하는 단계에서,제1 필터를 이용하여 상기 마이크로웰 어레이의 제1 이미지를 획득하고, 동일한 위치에 대응하여 제2 필터를 이용하여 상기 마이크로웰 어레이의 제2 이미지를 획득하며,상기 제1 개수 및 제2 개수를 산출하는 단계에서,상기 제1 이미지를 이용하여 상기 제2 이미지를 표준화하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제2항에 있어서,PCR 프로토콜에 따라 수행된 상기 마이크로웰 어레이에 사용된 용액에는 PCR 중합효소, 프라이머, 샘플 DNA, 레퍼런스 색소 및 리포터 색소가 포함된 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제2항에 있어서,상기 제1 필터는 레퍼런스 색소에 대응하는 필터이며, 상기 제2 필터는 리포터 색소에 대응하는 필터인 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제2항에 있어서,상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 산출하는 단계에서,상기 제1 이미지를 이용하여 웰의 위치를 특정하고, 상기 제1 이미지에서 각 웰의 평균 레퍼런스 강도를 산출하며, 특정된 상기 웰의 위치 정보를 이용하여 상기 웰의 리포터 강도를 산출하고, 각각의 상기 웰에 대해 상기 리포터 강도를 상기 평균 레퍼런스 강도로 나누어 웰의 표준화 비율을 산출하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제5항에 있어서,상기 표준화 비율에 따라 상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 산출하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제6항에 있어서,상기 표준화 비율에 따라 히스토그램을 작성하고, 상기 DNA을 포함하는 마이크로웰과 상기 DNA을 포함하지 않는 마이크로웰을 분류하기 위한 임계값을 결정하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제5항에 있어서,상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 산출하는 단계에서,상기 제1 이미지를 이용하여 웰의 위치를 특정하되, 허프(Hough) 변환을 이용하여 불규칙한 형상의 웰 및 먼지 노이즈는 제외되는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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제1항에 있어서,상기 DNA 증식 개수 또는 밀도를 측정하는 단계에서, 다음 식에 따라 마이크로웰 당 평균 DNA 개수(λ)를 산출하며,상기 DNA 증식 개수(Nobject)는 다음 식에 따라 산출되며,여기서, λ는 마이크로웰 당 평균 DNA 개수, N1은 상기 DNA을 포함하는 마이크로웰의 개수, N2는 상기 DNA을 포함하지 않는 마이크로웰의 개수, 및 Nwells 는 마이크로웰의 전체 개수인 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석방법
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PCR 프로토콜에 따라 수행된 마이크로웰 어레이의 이미지로부터 DNA 증식 개수 또는 밀도를 분석하는 dPCR 분석장치에 있어서,다수의 웰이 형성된 마이크로웰 어레이로부터 적어도 2종류의 이미지를 획득하는 카메라;상기 카메라로부터 획득된 상기 2종류의 이미지를 이용하여 DNA를 포함한다고 평가되는 마이크로웰의 개수인 제1 개수(N1)와 DNA를 포함하지 않는다고 평가되는 마이크로웰의 개수인 제2 개수(N2)를 산출하는 마이크로웰 분류부; 및상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 이용하여 마이크로웰 어레이의 DNA 증식 개수 또는 밀도를 측정하는 산출부;를 구비하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제11항에 있어서,상기 마이크로웰 분류부는, 제1 필터를 이용하여 상기 마이크로웰 어레이의 제1 이미지를 획득하는 제1 이미지 생성부, 동일한 위치에 대응하여 제2 필터를 이용하여 상기 마이크로웰 어레이의 제2 이미지를 획득하는 제2 이미지 생성부, 상기 제1 이미지를 이용하여 상기 제2 이미지를 표준화하는 광 강도 비교부, 및 상기 DNA을 포함하는 마이크로웰의 개수인 상기 제1 개수(N1)와 상기 DNA을 포함하지 않는 마이크로웰의 개수인 상기 제2 개수(N2)를 산출하는 이미지 카운팅부를 포함하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제12항에 있어서,PCR 프로토콜에 따라 수행된 상기 마이크로웰 어레이에 사용된 용액에는 PCR 중합효소, 프라이머, 샘플 DNA, 레퍼런스 색소 및 리포터 색소가 포함된 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제12항에 있어서,상기 제1 필터는 레퍼런스 색소에 대응하는 필터이며, 상기 제2 필터는 리포터 색소에 대응하는 필터인 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제12항에 있어서,상기 광 강도 비교부는 상기 제1 이미지를 이용하여 웰의 위치를 특정하고, 상기 제1 이미지에서 각 웰의 평균 레퍼런스 강도를 산출하며, 특정된 상기 웰의 위치 정보를 이용하여 상기 웰의 리포터 강도를 산출하고, 각각의 상기 웰에 대해 상기 리포터 강도를 상기 평균 레퍼런스 강도로 나누어 웰의 표준화 비율을 산출하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제15항에 있어서,상기 이미지 카운팅부는 상기 표준화 비율에 따라 상기 제1 개수(N1)와 상기 제2 개수(N2)를 산출하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제16항에 있어서,상기 이미지 카운팅부는 상기 표준화 비율에 따라 히스토그램을 작성하고, 상기 DNA을 포함하는 마이크로웰과 상기 DNA을 포함하지 않는 마이크로웰을 분류하기 위한 임계값을 결정하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제15항에 있어서,상기 광 강도 비교부는, 상기 제1 이미지를 이용하여 웰의 위치를 특정하되, 허프(Hough) 변환을 이용하여 불규칙한 형상의 웰 및 먼지 노이즈를 제외하는 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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제11항에 있어서,상기 산출부는 다음 식에 따라 마이크로웰 당 평균 DNA 개수(λ)를 산출하며,상기 DNA 증식 개수(Nobject)는 다음 식에 따라 산출되며,여기서, λ는 마이크로웰 당 평균 DNA 개수, N1은 상기 DNA을 포함하는 마이크로웰의 개수, N2는 상기 DNA을 포함하지 않는 마이크로웰의 개수, 및 Nwells 는 마이크로웰의 전체 개수인 것을 특징으로 하는 마이크로웰 어레이를 이용한 dPCR 분석장치
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