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정상 섬유아세포(normal fibroblast) 및 세포외 기질(extracellular matrix)을 포함하는 제1 세포층; 및상기 제1 세포층 상에 형성된 상피세포를 포함하는 제2 세포층을 포함하고,상기 제1 세포층과 제2 세포층 사이에는, 암 세포를 포함하는 암 스페로이드가 분산되어 있는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 1 항에 있어서, 상기 암 스페로이드는 암-연관 섬유모세포(cancer-associated fibroblast; CAF)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 2 항에 있어서, 상기 암 스페로이드는 암 세포와 암-연관 섬유모세포(cancer-associated fibroblast; CAF)가 1 : 2-4의 중량비로 혼합된 배지로부터 제조된 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 1 항에 있어서, 상기 세포외 기질은 피브린(fibrin), 피브리노겐, 파이브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin), 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 히알루론산, 프로테오글리칸, 헤파린 설페이트, 콘드로틴 설페이트, 케라틴 설페이트, 인테그린(integrin) 및 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan)으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 1 항에 있어서, 상기 상피세포는 각질세포(keratinocyte)인 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 1 항에 있어서, 상기 상피세포는 구강, 식도, 인두 및 피부로부터 선택되는 어느 하나 이상으로부터 유래된 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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제 1 항에 있어서,상기 정상 섬유아세포는 구강, 식도, 인두 및 피부으로부터 선택되는 어느 하나 이상으로부터 유래된 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델
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1) 개체로부터 분리된 피부 또는 점막조직에서 상피층과 상피하층을 분리하는 단계;2) 상기 1) 단계에서 분리된 상피층과 상피하조직층을 각각 배양 후, 단일세포화(single cell suspension)하는 단계;3) 개체로부터 분리된 암 세포 또는 종래의 암 세포를 배양하고, 원심분리하여 암 스페로이드를 제조하는 단계; 및4) 상기 2) 단계에서 단일세포화된 상피하조직의 섬유화세포를 세포외 기질이 포함된 배양접시에 분주한 후, 3) 단계로부터 제조된 암 스페로이드를 뿌리고, 상기 2) 단계에서 단일세포화된 상피층의 상피세포를 상기 암 스페로이드 상에 분주하여 배양하는 단계;를 포함하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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제 8 항에 있어서,상기 3) 단계에 암-연관 섬유모세포(cancer-associated fibroblast;CAF)를 더 포함하여 암 스페로이드를 제조하는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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제 9 항에 있어서, 상기 3) 단계로부터 제조된 암 스페로이드는 암 세포와 암-연관 섬유모세포(cancer-associated fibroblast;CAF)가 1 : 2-4의 중량비로 혼합된 배지로부터 제조된 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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제 8 항에 있어서, 상기 세포외 기질은 피브린(fibrin), 피브리노겐, 파이브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin), 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 히알루론산, 프로테오글리칸, 헤파린 설페이트, 콘드로틴 설페이트, 케라틴 설페이트, 인테그린(integrin) 및 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan)으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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제 8 항에 있어서, 상기 3) 단계에서 원심분리는 100 내지 10000 × g로 수행되는 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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제 8 항에 있어서, 상기 배양접시는 바람직하게 세포 인서트(cell insert, insert well)인 것을 특징으로 하는 3D 암 세포 모델의 제조방법
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1) 제1항에 따른 3D 암 세포 모델에 후보물질을 처리하는 단계;2) 상기 3D 암 세포 모델에 존재하는 암 스페로이드의 세포 생존율, 크기, 암 영역, 저산소 영역, 전이, 이동 및 침윤 중에서 어느 하나 이상의 상태를 분석하거나, TGFB1, CDH2, VIM 및 ACTB 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 mRNA 또는 TGF-β1(pro- 및 active forms), N-카데린(cadherin) 및 비멘틴(vimentin) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 단백질 발현을 분석하고, 이를 감소하거나 저해하는 후보물질을 선별하는 단계를 포함하는 항암제 스크리닝 방법
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