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리보핵산분해효소 5(Ribonuclease 5)를 각막내피세포에 과발현시키는 단계(제1단계); 상기 제1단계의 리보핵산분해효소 5가 과발현된 각막내피세포를 바이오잉크에 분산시키는 단계(제2단계); 상기 제2단계의 각막내피세포가 분산된 바이오잉크를 가축으로부터 분리되어 동결건조된 양막에 바이오 프린팅하는 단계(제3단계); 및 상기 제3단계의 바이오 프린팅된 양막에 자외선을 조사하여 교차결합시키는 단계(제4단계)를 포함하는 것을 특징으로 하는 3차원 바이오 프린팅된 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1에 있어서, 상기 제1단계의 리보핵산분해효소 5가 과발현된 각막내피세포는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 리보핵산분해효소 5 유전자를 포함하는 재조합 벡터로 각막내피세포를 형질전환시켜 리보핵산분해효소 5를 과발현시키는 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 2에 있어서, 상기 재조합 벡터는 하기 개열지도 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1에 있어서, 상기 각막내피세포는 사람에게서 분리된 각막내피세포인 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1에 있어서, 상기 제2단계의 각막내피세포가 분산된 바이오잉크는 리보핵산분해효소 5가 과발현된 각막내피세포를 3×106 cell/mL 농도로 바이오 잉크에 분산시키는 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1에 있어서, 상기 제3단계는 각막내피세포가 분산된 바이오잉크를 동결건조 및 무세포화 처리된 소 양막에 0
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청구항 1에 있어서, 상기 제4단계는 바이오 프린팅된 양막에 360nm 자외선을 10 내지 20초간 조사하여 교차결합시키는 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1에 있어서, 상기 각막 내피 이식체 제조방법은 제4단계 이후 자외선 조사된 각막 내피 이식체를 37℃에서 10일간 배양하는 단계를 추가로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체 제조방법
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청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 따른 리보핵산분해효소 5(Ribonuclease 5)가 과발현된 각막내피세포가 양막 위에 3차원 바이오 프린팅된 각막 내피 이식체
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청구항 9에 있어서, 상기 각막 내피 이식체는 양막 위에 3차원 바이오 프린팅된 리보핵산분해효소 5(Ribonuclease 5)가 과발현된 각막내피세포는 양막 위에 3차원 바이오 프린팅된 리보 핵산분해효소 5가 과발현되지 않은 대조군 각막내피세포보다 Na+-K+ ATPase 및 CD166 발현이 증가된 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체
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청구항 9에 있어서, 상기 각막 내피 이식체는 양막 위에 3차원 바이오 프린팅된 리보핵산분해효소 5(Ribonuclease 5)가 과발현된 각막내피세포는 양막 위에 3차원 바이오 프린팅된 리보 핵산분해효소 5가 과발현되지 않은 대조군 각막내피세포보다 ZO-1(zonular occludens-1) 발현이 증가되어 각막 내피 표현형이 증가된 것을 특징으로 하는 각막 내피 이식체
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