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표적 유전자 결합 부위와 패드락 프로브(Padlock probe)에 상보적으로 결합하는 결합 부위를 포함하는 헤어핀 프라이머; 및상기 헤어핀 프라이머에 상보적으로 결합하는 프라이머 결합 부위, 표적 유전자 결합 부위, 형광 검출을 위한 표지자 부위 및 덤벨 형태를 형성하기 위한 프로브 내 상보적인 결합 부위를 포함하는 패드락 프로브;를 포함하는 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 헤어핀 프라이머가 표적 유전자에 결합하면 패드락 프로브에 상보적인 결합부위가 노출되고, 노출된 헤어핀 프라이머의 말단이 패드락 프로브에 결합되어 표적 유전자 - 헤어핀 프라이머 - 패드락 프로브로 이루어지는 삼성분 개시복합체(ternary components initiation complex)가 형성되는 것인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 패드락 프로브의 표적 유전자 결합 부위는 15 내지 25 mer 길이를 가지는 것을 특징으로 하는 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 패드락 프로브의 프라이머 결합 부위는 10 내지 12 mer 길이를 가지는 것을 특징으로 하는 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 패드락 프로브의 덤벨 형태를 형성하기 위한 주형 내 상보적인 결합 부위는 총 12 내지 20 mer 길이를 가지는 것을 특징으로 하는 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 표적 유전자는 인플루엔자 바이러스로부터 유래한 것인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 패드락 프로브의 서열은 서열번호 4, 서열번호 9 및 서열번호 14로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 염기서열인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서, 상기 헤어핀 프라이머의 서열은 서열번호 5, 서열번호 10 및 서열번호 15로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 염기서열인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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9
제1항에 있어서, 상기 표적 유전자는 120 내지 250 mer의 길이를 가지는 것을 특징으로 하는 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제1항에 있어서,상기 표적 유전자는 A형 인플루엔자 바이러스 H1N1, A형 인플루엔자 바이러스 H3N2 및 B형 인플루엔자 바이러스 야마가타 리니지(yamagata lineage)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 바이러스로부터 유래된 유전자이며, 상기 표적 유전자의 검출신호의 세기는 비표적 바이러스 유전자의 검출신호 대비 평균 11
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제1항에 있어서, 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)을 위한 표적 유전자 증폭용 조성물을 추가적으로 포함하는, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제11항에 있어서, 상기 표적 유전자 증폭용 조성물은 DNA 중합효소, 반응 완충용액, 데옥시뉴클레오티드(dNTPs), 표적 유전자 증폭용 프라이머 세트 및 람다 핵산말단분해효소(lambda-exonuclease)를 포함하는 것인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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제12항에 있어서, 상기 표적 유전자 증폭용 프라이머 세트는 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어지는 프라이머 세트, 서열번호 6 및 서열번호 7의 염기서열로 이루어지는 프라이머 세트 및 서열번호 11 및 서열번호 12의 염기서열로 이루어지는 프라이머 세트에서 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트인, 회전환 증폭(Rolling Circle Amplification, RCA) 기반 표적 유전자 검출용 키트
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중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)으로 표적 유전자를 증폭시키는 단계(S1);상기 (S1) 단계에서 증폭된 이중가닥의 표적 유전자로부터 단일가닥의 표적 유전자를 수득하는 단계(S2);상기 (S2) 단계에서 수득한 단일가닥의 표적 유전자와 헤어핀 프라이머 및 패드락 프로브(Padlock probe)을 포함하는 반응용액을 반응시켜 삼성분 개시복합체(ternary components initiation complex) 형성과 함께 회전환 증폭(Rolling circle amplification, RCA)을 수행하여 단일가닥의 유전자를 얻는 단계(S3); 및상기 (S3) 단계에서 증폭된 단일가닥의 유전자를 확인하는 단계(S4);를 포함하고,상기 헤어핀 프라이머는 표적 유전자 결합 부위와 패드락프로브(Padlock probe)에 상보적으로 결합하는 결합 부위를 포함하며,상기 패드락 프로브(Padlock probe)는 상기 헤어핀 프라이머에 상보적으로 결합하는 프라이머 결합 부위, 표적 유전자 결합 부위, 형광 검출을 위한 표지자 부위 및 덤벨 형태를 형성하기 위한 프로브 내 상보적인 결합 부위를 포함하는, PCR-RCA 이중증폭 기반 표적 유전자의 검출방법
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제14항에 있어서, 상기 (S1) 단계는 프라이머 쌍 중 어느 하나에만 말단에 인산기가 결합된 것을 사용하여 표적 유전자를 증폭시키는 것인, PCR-RCA 이중증폭 기반 표적 유전자의 검출방법
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제14항에 있어서, 상기 (S2) 단계는 이중가닥 표적 유전자 중 인산기가 결합된 가닥이 람다-핵산말단분해효소에 의해 분해되어 단일가닥의 표적 유전자를 생성하는 것을 특징으로 하는, PCR-RCA 이중증폭 기반 표적 유전자의 검출방법
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제14항에 있어서, 상기 (S3) 단계의 회전환 증폭에 phi29 DNA 중합효소를 사용하는 것인, PCR-RCA 이중증폭 기반 표적 유전자의 검출방법
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제14항에 있어서, 상기(S4) 단계의 증폭된 유전자 확인은 티오플라빈 T가 (S3)단계에서 증폭된 단일가닥 DNA의 G-사중나선 구조에 삽입되어 나타나는 형광을 검출하는 것인, PCR-RCA 이중증폭 기반 표적 유전자의 검출방법
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