| 1 |
1
질병 관련 표적 바이러스의 비증폭 및 비형광 검출방식을 통하여 정량 스크리닝하는 방법으로서,a) 상기 표적 바이러스에 특이적으로 결합하는 프로브 올리고머가 제1 금속-나노패턴화된 기재에 고정된 포획 나노패드, 및 제2 금속 함유 나노입자가 상기 표적 바이러스에 특이적으로 결합하는 검출 올리고머와 결합된 검출 태그를 포함하는 플랫폼을 제공하는 단계, 여기서 제1 금속 및 제2 금속은 서로 흡수스펙트럼이 중첩되지 않도록 선택됨;b) 분석 샘플 내 표적 바이러스를 검출 태그의 검출 올리고머 및 포획 나노패드의 프로브 올리고머와 혼성화 반응시키는 단계;c) 광원으로부터 조사된 광을 전반사시켜 소산장을 형성하고, 상기 소산장에 의하여 검출 태그 및 상기 포획 나노패드로부터 발생되는 전반사산란 신호를 생성하는 단계; 및d) 상기 생성된 전반사산란 신호를 투과격자미러(TG)로 통과시켜 제1 금속으로부터 기인하는 산란 신호 및 제2 금속으로부터 기인하는 산란 신호로 분할함으로써 비분산(non-dispersed) 또는 0차의 분광학적 영상(spectral image), 그리고 분산된(dispersed) 또는 1차 이상의 분광학적 영상을 생성하여 수집하는 단계;를 포함하며,여기서, 가우시안 맞춤에 의한 데이터 처리를 통하여 상기 분할된 산란 신호 각각에 대한 중심 위치 정보 또는 차수 간의 간격을 측정하는 방법
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 단계 d)는 분석 샘플 내 표적 바이러스를 검출 태그의 검출 올리고머와 1차 혼성화 반응시키는 단계, 그리고 상기 포획 나노패드의 프로브 올리고머와 상기 1차 혼성화 반응 생성물을 반응시키는 2차 혼성화 반응 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 3 |
3
제1항에 있어서, 상기 플랫폼의 제1 금속-나노패턴은 투과격자미러를 통과한 제1 및 제2 금속으로부터 발생된 전반사 산란 신호의 비분산된 또는 0차 분광학적 영상과 분산된 또는 1차 이상의 분광학적 영상이 중첩되지 않도록 배열되는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 전반사산란을 유발하기 위한 소산장 형성을 위하여 포획 나노패드의 하부에 장착된 프리즘을 통하여 광원을 조사하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 5 |
5
제1항에 있어서, 상기 비분산된 또는 0차 분광학적 영상 및 상기 분산된 또는 1차 이상의 분광학적 영상이 단일 샷으로 수집되는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서, 상기 광원은 단일 파장의 광원인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서, 가우시안 맞춤에 의한 데이터 처리를 통하여 분할된 산란 신호 각각에 대한 중심 위치 정보 또는 차수 간의 간격을 측정함으로써 분광학적 영상의 픽셀 간의 거리를 산출하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 상기 표적 바이러스는 아데노바이러스 7; PRRSV; 인플루엔자 바이러스; 연어 빈혈(salmon anaemia) 바이러스; 돼지 콜레라 바이러스(classical swine fever); C형 간염 바이러스; E형 간염 바이러스; 아프리카 돼지 콜레라(African swine fever) 바이러스; 푸말라(Puumala) 바이러스; 전염성 기관지염 바이러스; 전달성 위창자염(transmissible gastroentertis); 사스 코로나바이러스(SARS CoV); 므라버그(Mraburg) 바이러스; 에볼라 바이러스; 웨스트나일 바이러스; 황열병 바이러스; 진드기 매개 뇌염 바이러스; 소 하리증(bovine diarrhea) 바이러스; 개 파보바이러스(parvovirus); 콕사키(Coxsackie) B3; 콕사키 B5; 조류 레오바이러스(reovirus); 로타바이러스(rotavirus); 셈리키 삼림열(Semliki forest) 바이러스; 또는 돼지 제2형 써코(circo type 2) 바이러스인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 9 |
9
제8항에 있어서, 상기 표적 바이러스는 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 10 |
10
제2항에 있어서, 상기 1차 혼성화 반응 및 상기 2차 혼성화 반응 각각은 50 내지 80℃ 범위에서 선정되는 온도, 그리고 20 내지 120분 범위에서 선정되는 반응 시간 조건 하에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 11 |
11
제1항에 있어서, 상기 제1 금속은 금(Au)이고, 상기 제2 금속은 은(Ag)인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 12 |
12
제11항에 있어서, 상기 포획 나노패드의 나노패턴은 티올기(-SH)를 이용하여 공유결합이 용이하도록 처리된 것을 특징으로 하는 방법
|
| 13 |
13
제11항에 있어서, 상기 제1 금속-나노패턴화된 기재에 프로브 올리고머를 고정화하기 위하여, 제1 금속 나노패턴의 표면을 프로브 올리고머를 함유하는 완충 용액과 화학적 흡착 반응시키고, 상기 표적 바이러스와의 혼성화 반응에 앞서 비특이적 결합을 억제하기 위하여 블로킹하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 14 |
14
제13항에 있어서, 상기 블로킹하는 단계는 머캅토헥산올을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 15 |
15
제11항에 있어서, 상기 검출 태그의 검출 올리고머와 표적 바이러스 간의 혼성화 반응 전에 검츨 태그의 제2 금속 나노입자의 표면을 개질하는 단계를 더 포함하며, 상기 표면을 개질하는 단계는 알칸티올(HS(CH2)nX) 단일층을 형성하는 것을 특징으로 하는 방법:여기서, X는 -COOH 또는 -OH이고, n은 1 내지 15임
|
| 16 |
16
제15항에 있어서, 상기 알칸티올 단일층을 형성하는 것은 화학식 [HS-(CH2)n-COOH](n은 1 내지 15)으로 표시되는 머캅토카르본산을 사용하거나, 또는 머캅토알코올을 사용하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 17 |
17
제15항에 있어서, 상기 개질된 제2 금속 함유 나노입자는 EDC 및 NHSS를 이용하여 활성화된 후에 상기 검출 올리고머와 반응하여 검출 태그를 형성하는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 18 |
18
제9항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스는 H7N9 바이러스인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 19 |
19
질병 관련 표적 바이러스의 비증폭 및 비형광 방식을 통하여 단일 샷으로 정량 스크리닝하기 위한 검출 시스템으로서,단일 파장의 레이저 광원;상기 광원으로부터 조사된 입사광을 전반사시켜 소산장을 형성하도록 구성된 도브 프리즘;제1 금속-나노패턴화된 기재 상에 표적 바이러스에 특이적으로 결합하는 프로브 올리고머가 고정된 포획 나노패드, 및 제2 금속 함유 나노입자가 표적 바이러스에 특이적으로 결합하는 검출 올리고머와 결합된 검출 태그를 포함하는 플랫폼, 여기서 제1 금속 및 제2 금속은 서로 흡수스펙트럼이 중첩되지 않도록 선택되며, 상기 포획 나노패드는 상기 도브 프리즘 상의 소산장 영역에 위치하도록 배열되며, 상기 포획 나노패드의 프로브 올리고머 및 상기 검출 태그의 검출 올리고머가 표적 바이러스와 혼성화 반응되어 결합할 경우, 제1 금속 및 제2 금속으로부터 유래되는 전반사산란 신호를 생성함;상기 포획 나노패드 상측에 이격되어 상기 전반사 산란 신호를 수집하도록 배열된 대물렌즈; 및상기 대물렌즈 상측에 배치되어 상기 수집된 전반사산란 신호를 제1 금속으로부터 유래하는 산란 신호 및 제2 금속으로부터 유래하는 산란 신호로 분할하는 투과격자미러; 및가우스 맞춤에 의한 데이터 처리를 통하여 상기 분할된 산란 신호 각각에 대한 중심 위치 정보 또는 차수 간의 간격을 측정하여 이를 이미지화하는 영상화 처리부를 포함하는 검출부;를 포함하는 검출 시스템
|
