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무세포 단백질 합성 방법을 이용하여 생산된 항체의 세포질 내로의 유입을 간편하게 분석하는 방법

  • 기술번호 : KST2019026864
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 무세포 단백질 합성 방법을 이용하여 생산된 항체의 세포질 내로의 유입을 간편하게 분석하는 방법에 관한 것으로, 세포 내 단백질과 이들의 상호작용을 표적으로 하는 신규 항체들의 개발에 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 본 발명을 통해 쪼개진 GFP 상보성(split GFP complementation)을 기반으로 하여 시간 소모적인 다단계 염색 절차 없이 세포질 내로 항체 전달을 확인하는데 필요한 시간을 단축시켜 세포질 내 유입 여부를 간편하고 신속하게 분석할 수 있을 뿐만 아니라, 무세포 단백질 합성으로 생산된 항체를 정제하지 않고 바로 분석에 이용할 수 있는 이점이 있다.
Int. CL G01N 33/58 (2006.01.01) C07K 16/00 (2006.01.01) C12N 9/64 (2006.01.01)
CPC G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01) G01N 33/581(2013.01)
출원번호/일자 1020160062879 (2016.05.23)
출원인 충남대학교산학협력단
등록번호/일자 10-1667023-0000 (2016.10.11)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20161017) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.05.23)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김동명 대한민국 대전광역시 서구
2 이경호 대한민국 대전광역시 유성구
3 김용성 대한민국 경기도 수원시 팔달구
4 민승의 대한민국 대전광역시 서구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 최규환 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***, **층 그린국제특허법률사무소 (둔산동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2016.05.23 수리 (Accepted) 1-1-2016-0493033-81
2 [우선심사신청]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Preferential Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)
2016.05.26 수리 (Accepted) 1-1-2016-0509518-32
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2016.06.17 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2016.07.08 수리 (Accepted) 9-1-2016-0029216-87
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2016.07.12 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0504469-78
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2016.07.29 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-0739717-05
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2016.07.29 수리 (Accepted) 1-1-2016-0739726-16
8 등록결정서
Decision to grant
2016.10.11 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0727841-79
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번호 청구항
1 1
(a) Factor Xa를 포함하는 무세포 단백질 합성 반응액에 합성 주형으로서 5'에서 3' 방향으로 프로모터; 유비퀴틴; Factor Xa 절단 부위; 중쇄 가변 영역 및 세포막 투과성 경쇄 가변 영역이 도입된 경쇄 가변 영역으로 이루어진 scFv 항체; GFP11 및 스트렙트아비딘(streptavidin) 결합 펩티드를 코딩하는 서열; 및 터미네이터가 작동가능하게 연결된 유전자를 첨가하여 항체를 생산하는 단계; 및(b) 상기 생산된 항체를 GFP1-10를 발현하는 동물세포에 처리하여 동물세포의 세포질 내에서 GFP 형광을 검출하는 단계;를 포함하는 무세포 단백질 합성 방법을 이용하여 생산된 항체의 세포질 내로의 유입을 간편하게 분석하는 방법
2 2
삭제
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삭제
4 4
삭제
5 5
제1항에 있어서, 상기 동물세포는 GFP1-10를 발현하는 HeLa 세포인 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 유전자는 6xHis tag 코딩 서열을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 무세포 단백질 합성 반응액 중의 Factor Xa의 농도는 40㎍/mL 이상인 것을 특징으로 하는 방법
8 8
제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 생산된 항체는 정제되거나 정제되지 않은 것을 특징으로 하는 방법
9 9
Factor Xa를 포함하는 무세포 단백질 합성 반응액에 합성 주형으로서 5'에서 3' 방향으로 프로모터, 유비퀴틴, Factor Xa 절단 부위, 6xHis tag, 중쇄 가변 영역 및 세포막 투과성 경쇄 가변 영역이 도입된 경쇄 가변 영역으로 이루어진 scFv 항체, GFP11 및 스트렙트아비딘 결합 펩티드를 코딩하는 서열 및 터미네이터가 작동가능하게 연결된 유전자를 첨가하여 무세포 단백질 합성 방법으로 항체를 생산하는 방법
10 10
제9항의 방법에 의해 생산되며, 6xHis tag, 중쇄 가변 영역 및 세포막 투과성 경쇄 가변 영역이 도입된 경쇄 가변 영역으로 이루어진 scFv 항체, GFP11 및 스트렙트아비딘 결합 펩티드로 이루어진 항체
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 아주대학교 원천기술개발사업 DNA 라이브러리 발현 및 세포내 활성 동시 분석기술