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⒜ 유도 물질에 의해 발현되는 유도성 프로모터와 작동가능하게 연결된 Cas(CRISPR associated protein) 단백질을 코딩하는 제1 핵산 단편;숙주세포 생존에 필수적인 유전자의 발현을 억제하는 sgRNA(single guide RNA)를 코딩하는 하나 이상의 제2 핵산 단편; 및제1 벡터의 형질전환 여부를 확인하는 선별 단백질을 코딩하는 제3 핵산 단편을 포함하는 제1 벡터; 및⒝ 숙주세포 내에서 발현시키고자 하는 하나 이상의 단백질을 코딩하는 하나 이상의 목적 유전자 단편; 및상기 제2 핵산 단편을 표적하는 sgRNA를 코딩하는 제4 핵산 단편을 포함하는 하나 이상의 제2 벡터를 포함하는, 목적 유전자로 형질전환된 숙주세포를 선별하기 위한 키트
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제1항에 있어서, 상기 상기 Cas 단백질은 dCas9, Cse1, Cse2, Cas7, Cas5, Cas6e 및 dCpf1(CXXC finger protein 1)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 키트
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제1항에 있어서, 상기 숙주세포는 영양요구성을 나타내는 미생물인 것인 키트
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제3항에 있어서, 상기 영양요구성은 D-글루타메이트를 필요로 하는 것인 키트
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제1항에 있어서, 상기 유도 물질은 람노오스, 아라비노오스 및 락토오스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 키트
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제1항에 있어서, 상기 숙주세포 생존에 필수적인 유전자는 해당과정(glycolysis)에 관여하는 유전자인 것인 키트
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제6항에 있어서, 상기 해당과정에 관여하는 유전자는 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소를 암호화하는 gapA 유전자인 것인 키트
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제1항에 있어서, 상기 ⒜의 선별 단백질은 D-아미노산 트랜스퍼라제 또는 항생제 분해 단백질인 것인 키트
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제8항에 있어서, 상기 항생제는 카나마이신, 암피실린, 테트라사이클린 및 클로람페니콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 키트
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10
제1항에 있어서, 상기 제1 벡터의 sgRNA 및 제2 벡터의 sgRNA는 항시성 프로모터에 의하여 발현되는 것인 키트
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목적 유전자로 형질전환시키고자 하는 숙주세포 및 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 키트를 접촉시키는 단계; 및상기 숙주세포를 유도성 프로모터의 발현 유도 물질, 항생제 또는 이들의 혼합물이 존재하는 조건에서 계대 배양하는 단계를 포함하는, 목적 유전자로 형질전환된 숙주세포의 제작 방법
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제11항에 있어서, 상기 형질전환시키고자 하는 숙주세포는 영양요구성 미생물인 것인 방법
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제11항에 있어서, 상기 발현 유도 물질은 람노오스, 아라비노오스 및 락토오스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법
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제11항에 있어서, 상기 항생제는 카나마이신, 암피실린, 테트라사이클린 및 페니실린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법
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⒜ 목적 산물을 생산하고자 하는 숙주세포와 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 키트를 접촉시키는 단계; ⒝ 상기 숙주세포를 유도성 프로모터의 발현 유도 물질, 항생제 또는 이들의 혼합물이 존재하는 조건에서 계대 배양하는 단계; 및⒞ 상기 배양 결과물로부터 목적 산물을 수득하는 단계를 포함하는, 목적 산물의 대량 생산 방법
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제15항에 있어서, 상기 형질전환시키고자 하는 숙주세포는 영양요구성 미생물인 것인 목적 산물의 대량 생산 방법
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제15항에 있어서, 상기 발현 유도 물질은 람노오스, 아라비노오스 및 락토오스로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 목적 산물의 대량 생산 방법
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제15항에 있어서, 상기 항생제는 카나마이신, 암피실린, 테트라사이클린 및 페니실린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 대량 생산 방법
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⒜ 유도 물질에 의해 발현되는 유도성 프로모터와 작동가능하게 연결된 Cas 단백질을 코딩하는 제1 핵산 단편; 및 숙주세포 생존에 필수적인 유전자의 발현을 억제하는 sgRNA를 코딩하는 하나 이상의 제2 핵산 단편을 포함하는 핵산 컨스트럭트가 염색체 내에 도입된 숙주세포; 및⒝ 숙주세포 내에서 발현시키고자 하는 하나 이상의 단백질을 코딩하는 하나 이상의 목적 유전자 단편; 및 상기 제2 핵산 단편을 표적하는 sgRNA를 코딩하는 제4 핵산 단편을 포함하는 하나 이상의 제2 벡터를 포함하는, 목적 유전자로 형질전환된 숙주세포를 선별하기 위한 키트
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