| 1 |
1
포자를 형성하는 바실러스 속 균주의 염색체에서 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 spo0A 유전자의 업스트림(upstream) 및 다운스트림(downstream)에 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 인식 서열이 삽입되고, 포자형성기의 전포자에만 특이적으로 작동하는(forespore-specific) 프로모터와 상기 프로모터로 발현되는 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF(open-reading frame)가 염색체에 삽입되어 이루어진 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 2 |
2
제1항에 있어서,상기 부위 특이적 재조합효소 인식 서열은 Cre 재조합효소(Cre recombinase)의 인식서열인 서열번호 3로 기재되는 loxP 서열 또는 FLP 재조합효소(FLP rocombinase)의 인식서열인 서열번호 5의 플립파아제 인식 표적(flippase recognition target, FRT)인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 3 |
3
제1항에 있어서,상기 부위 특이적 재조합효소 인식 서열은 spo0A 유전자로부터 업스트림 방향으로 209번째 염기에 삽입되고, spo0A 유전자로부터 다운스트림 방향으로 141번째 염기에 삽입된 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 4 |
4
제 1항에 있어서,상기 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF는 서열번호 2로 표시되는 Cre 재조합효소(Cre recombinase)의 ORF 또는 서열번호 4로 표시되는 FLP 재조합효소(FLP recombinase)의 ORF 인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 5 |
5
제1항에 있어서,상기 포자형성기의 전포자에만 특이적으로 작동하는(forespore-specific) 프로모터는 시그마 인자 G(sG) 또는 시그마 인자 F(sF)에 의해 발현이 조절되는 유전자의 프로모터인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 6 |
6
제5항에 있어서,상기 포자형성기의 전포자에만 특이적으로 작동하는(forespore-specific) 프로모터는 서열번호 29로 표시되는 BMB171_C0536 유전자의 프로모터 또는 서열번호 32으로 표시되는 BMB171_C4286 유전자의 프로모터인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 7 |
7
제1항에 있어서,상기 포자형성기의 전포자에만 특이적으로 작동하는(forespore-specific) 프로모터와 상기의 프로모터로 발현되는 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF가 염색체에 삽입된 부위는 BMB171_C4815 좌위인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 8 |
8
제1항에 있어서,상기 바실러스 속 균주는 바실러스 쑤린지엔시스(Bacillus thuringiensis), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실러스 애트로페우스(Bacillus atrophaeus) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 상기 단회 포자 형성 균주는 기탁번호가 KCTC18454P인 단회 포자 형성 균주
|
| 10 |
10
제1항에 있어서, 상기 단회 포자 형성 균주는 포자 형성기인 경우에, 상기 전포자 특이적인 프로모터에 의해 발현된 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 활성으로 spo0A 유전자가 제거되는 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주
|
| 11 |
11
포자를 형성하는 바실러스 속 균주의 염색체에, 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 표시되는 spo0A 유전자 업스트림(upstream) 및 다운스트림(downstream)에 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 인식 서열을 삽입하는 제1단계; 및포자 형성기의 전포자(forespore)에서만 특이적으로 발현되는 프로모터와 상기의 프로모터로 발현되는 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF(open reading frame)를 염색체에 삽입하는 제2단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 12 |
12
제11항에 있어서,상기 제1단계는 상기 부위 특이적 재조합효소의 인식 서열로 Cre 재조합효소(Cre recombinase)의 인식서열인 서열번호 3로 기재되는 loxP 서열 또는 FLP 재조합효소(FLP rocombinase)의 인식서열인 서열번호 5의 플립파아제 인식 표적(flippase recognition target, FRT)을 spo0A 유전자 업스트림(upstream) 및 다운스트림(downstream)에 삽입하는 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 13 |
13
제 11항에 있어서,상기 제1단계는 부위 특이적 재조합효소의 인식 서열이 spo0A 유전자로부터 업스트림 방향으로 209번째 염기에 삽입되고, spo0A 유전자로부터 다운스트림 방향으로 141번째 염기에 삽입하는 것을 특징으로 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 14 |
14
제11항에 있어서,상기 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF는 서열번호 2로 표시되는 Cre 재조합효소(Cre recombinase)의 ORF 또는 서열번호 4로 표시되는 FLP 재조합효소(FLP recombinase)의 ORF 인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 15 |
15
제11항에 있어서,상기 전포자(forespore)에서만 특이적으로 발현되는 프로모터는 시그마 인자 G(sG) 또는 시그마 인자 F(sF)에 의해 발현이 조절되는 유전자의 프로모터인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 16 |
16
제15항에 있어서,상기 전포자(forespore)에서만 특이적으로 발현되는 프로모터는 서열번호 29로 표시되는 BMB171_C0536 유전자의 프로모터 또는 서열번호 32으로 표시되는 BMB171_C4286 유전자의 프로모터인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 17 |
17
제11항에 있어서,상기 제2단계는 상기 전포자(forespore)에서만 특이적으로 발현되는 프로모터와 상기의 프로모터로 발현되는 부위 특이적 재조합효소(site-specific recombinase)의 ORF(open-reading frame)가 바실러스 속 균주 염색체의 BMB171_C4815 좌위에 삽입되는 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
| 18 |
18
제11항에 있어서,상기 바실러스 속 균주는 바실러스 쑤린지엔시스(Bacillus thuringiensis), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis), 바실러스 애트로페우스(Bacillus atrophaeus) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 단회 포자 형성 균주의 제조방법
|
