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프로모터, 단일가닥 msRNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 도너 DNA 서열을 포함하는 변형된 단일가닥 msDNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 역전사효소를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 레트론(retron) 핵산; 및프로모터, 가이드 RNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 터미네이터를 포함하는 단일가닥 가이드 RNA(sgRNA) 핵산을 순차적으로 포함하는 재조합 핵산 구조체
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제1항에 있어서,레트론 핵산과 가이드 RNA 핵산의 프로모터는 서로 다른 유도성 프로모터인, 재조합 핵산 구조체
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제2항에 있어서,유도성 프로모터는 T7 프로모터, SP6 프로모터, rpr-1 프로모터, rrk 프로모터 또는 U6 프로모터 중 어느 하나인, 재조합 핵산 구조체
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제1항에 있어서,재조합 핵산 구조체는 단일가닥 DNA 어닐링 재조합효소(recombinase)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 재조합 핵산 구조체
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제4항에 있어서,단일가닥 DNA 어닐링 재조합효소는 베타 재조합효소 또는 베타 재조합효소의 상동체인, 재조합 핵산 구조체
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제5항에 있어서,단일가닥 DNA 어닐링 재조합효소는 박테리오파지 람다 베타 재조합효소 또는 박테리오파지 람다 베타 재조합효소의 상동체인, 재조합 핵산 구조체
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제4항에 있어서,단일가닥 DNA 어닐링 재조합효소는 역전사효소를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 다운스트림에 위치하는, 재조합 핵산 구조체
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제1항에 있어서,도너 DNA는 PAM 서열을 포함하고, 표적 DNA에 대해 1 내지 3개의 뉴클레오티드의 미스매치를 갖는 변이 코돈을 포함하는 상동 서열로 이루어진 것인, 재조합 핵산 구조체
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제1항에 있어서,가이드 RNA는 표적 DNA를 인식하는 스페이서; 및 crRNA 및 tracrRNA로 이루어진 단일가닥 RNA 스캐폴드를 포함하는, 재조합 핵산 구조체
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제9항에 있어서,스페이서는 protospacer adjacent motifs(PAMs) 서열의 일부 또는 전체를 포함하는, 재조합 핵산 구조체
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제1항에 있어서,터미네이터는 T7 terminator, RNA Polymerase III terminator 또는 -TTTTTT- 서열 중 어느 하나인, 재조합 핵산 구조체
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제1항의 재조합 핵산 구조체를 포함하는 발현 벡터
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제12항의 발현 벡터로 형질전환된 숙주세포
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제13항에 있어서,숙주세포는 대장균(E
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제1항의 재조합 핵산 구조체를 포함하는 발현 벡터 또는 상기 발현 벡터로 형질전환된 숙주세포; 및Cas9 단백질 또는 Cas9 단백질을 발현하는 벡터를 포함하는 CRISPR-Cas9 기반 유전체상의 치환 변이용 조성물
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제15항에 있어서,조성물은 원핵 세포 또는 진핵 세포에서 단일 위치 또는 다중 위치 유전자의 표적화된 돌연변이를 유도하는 것인, CRISPR-Cas9 기반 유전체상의 치환 변이용 조성물
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제15항의 CRISPR-Cas9 기반 유전체상의 치환 변이용 조성물을 원핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 세포에 도입하거나, 인 비트로에서 인간 세포에 도입하여 유전체상에서 치환 변이를 유도하는 단계; 및상기 단계에서 치환 변이가 유도된 원핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 세포의 유전체, 또는 인 비트로에서 치환 변이가 유도된 인간 세포의 유전체로부터 msd 전구체의 서열을 분석하여 유전체상의 치환 변이를 추적하는 단계를 포함하는 유전체상의 치환 변이 추적 방법
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제15항의 CRISPR-Cas9 기반 유전체상의 치환 변이용 조성물을 원핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 세포에 도입하거나, 인 비트로에서 인간 세포에 도입하여 유전체상에서 약물과 연관된 유전자의 치환 변이를 유도하는 단계; 및상기 단계에서 치환 변이가 유도된 원핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 세포에 약물을 처리하거나, 상기 단계에서 치환 변이가 유도된 인간 세포에 대해 인 비트로에서 약물을 처리하고, 상기 원핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 세포의 유전체, 또는 인 비트로에서 치환 변이가 유도된 인간 세포의 유전체로부터 msd 전구체의 서열을 분석하여 유전체상의 약물 내성 변이를 추적하는 단계를 포함하는 유전체상의 약물 내성 변이의 추적 방법
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