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마이크로 RNA의 초민감성 정량 분석 방법 및 장치

  • 기술번호 : KST2019034522
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요약 본 발명은 DNA와 RNA의 이중가닥에 특이적으로 결합하는 하이브리드 결합 도메인 (hybrid binding domain, HBD)이 고정된 원자간력현미경의 탐침을 이용하여 무표지의 마이크로RNA를 초고민감도로 검출하는 방법 및 상기 하이브리드 결합도메인이 고정된 원자간력현미경의 탐침 및 무표지의 마이크로 RNA를 포함하는 정량분석장치에 관한 것이다.
Int. CL C12Q 1/68 (2018.01.01) G01Q 60/34 (2010.01.01) G01Q 60/42 (2010.01.01)
CPC C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01)
출원번호/일자 1020150164100 (2015.11.23)
출원인 주식회사 포스코, 포항공과대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1742211-0000 (2017.05.25)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20170531) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.11.23)
심사청구항수 19

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 포스코 대한민국 경상북도 포항시 남구
2 포항공과대학교 산학협력단 대한민국 경상북도 포항시 남구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박준원 대한민국 서울 서초구
2 김정훈 대한민국 서울 서초구
3 김영규 대한민국 전남 여수시 무
4 구현서 대한민국 서울 양천구
5 이윤희 대한민국 서울 강동구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 유미특허법인 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 서림빌딩 **층 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 포스코 경상북도 포항시 남구
2 포항공과대학교 산학협력단 경상북도 포항시 남구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2015.11.23 수리 (Accepted) 1-1-2015-1141065-19
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2016.09.20 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2016.12.06 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2016-0163492-32
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2016.12.12 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0892403-10
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2017.02.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0139381-85
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2017.02.10 수리 (Accepted) 1-1-2017-0139382-20
7 등록결정서
Decision to grant
2017.05.09 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0325316-37
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2018.04.30 수리 (Accepted) 4-1-2018-5077322-80
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.09.25 수리 (Accepted) 4-1-2019-5200802-82
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.09.30 수리 (Accepted) 4-1-2019-5204006-48
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.11.20 수리 (Accepted) 4-1-2019-5243581-27
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.11.22 수리 (Accepted) 4-1-2019-5245997-53
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.11.25 수리 (Accepted) 4-1-2019-5247115-68
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
바디; 및 상기 바디의 말단에 형성된 탐침(tip)을 포함하며, 상기 탐침의 표면에 고정되며, DNA/RNA 혼성화체의 이중나선 마이너 그루브에 염기서열 비특이적으로 결합하는 하이브리드 결합 도메인(hybrid binding domain, HBD) 또는 이의 변이체를 포함하는, 원자간력 현미경(atomic force microscope)용 캔틸레버
2 2
제1항에 있어서, 상기 하이브리드 결합 도메인은 인간 리보핵산가수분해효소 1(ribonuclease I, RNase I)의 아미노 말단 도메인인, 캔틸레버
3 3
제1항에 있어서, 상기 하이브리드 결합 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 캔틸레버,
4 4
제1항에 있어서, 상기 하이브리드 결합 도메인의 변이체는,상기 하이브리드 결합 도메인의 아미노 말단에 글루타티온 S-전달효소(glutathione S-transferase, GST)가 연결된 것;상기 하이브리드 결합 도메인에 히스티딘-태그가 연결된 것;상기 하이브리드 결합 도메인에 비오틴화된 것; 및상기 하이브리드 결합 도메인 내 위치 특이적 돌연변이가 형성된 것으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상인 것인, 캔틸레버
5 5
제4항에 있어서, 상기 하이브리드 결합 도메인의 아미노 말단에 연결된 글루타티온 S-전달 효소를 포함하는 하이브리드 결합 도메인의 변이체는, 글루타티온 S-전달 효소가 탐침에 고정되고, 변이체의 카르복시 말단은 탐침면과 반대방향으로 향하게 배향되는 것인, 캔틸레버
6 6
제1항에 있어서, 상기 DNA/RNA 혼성화체는 표적 마이크로 RNA(miRNA) 및 상기 표적 miRNA에 상보적으로 결합 가능한 프로브 DNA로 이루어지는 것인, 캔틸레버
7 7
제1항에 있어서, 상기 하이브리드 결합 도메인 또는 이의 변이체가 결합하는 DNA/RNA 혼성화체의 결합 위치가RNA 가닥 중 연속적인 2개 염기의 2'-OH기이고;DNA 가닥 중 3개의 포스포데옥시리보스 단위인 것인, 캔틸레버
8 8
제7항에 있어서, 상기 DNA/RNA 혼성화체의 결합하는 하이브리드 결합 도메인의 위치는, DNA/RNA 혼성화체의 DNA 가닥이 결합하는 하이브리드 결합 도메인의 Y3, K33, K34; 및 DNA/RNA 혼성화체의 RNA 가닥이 결합하는 하이브리드 결합 도메인의 W17 및 F32인, 캔틸레버
9 9
제6항에 있어서 상기 표적 miRNA는 단일 세포 유래인 것인, 캔틸레버
10 10
제1항 내지 제9항 중 어느 한 한에 따른 캔틸레버; 및표적 miRNA와 상보적으로 결합할 수 있는 염기서열을 포함하는 프로브 DNA가 고정된 기판을 포함하는, 초고민감도 마이크로 RNA 정량 분석 키트
11 11
제10항에 있어서, 상기 키트는 원자간력 현미경을 추가로 포함하는 것인 분석 키트
12 12
표적 마이크로RNA(miRNA)에 상보적으로 결합할 수 있는 염기서열을 포함하는 프로브 DNA를 기판 표면에 고정하여 프로브 DNA 스팟을 형성하고, 상기 기판에 표적 miRNA가 포함된 시료를 접촉시켜 상기 프로브 DNA와 마이크로 RNA로 이루어지는 DNA/RNA 혼성화체를 형성하는 단계;제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 따른 캔틸레버를 이용하여 상기 스팟의 결합힘-지도화를 수행하고, 상기 결합힘이 관찰되는 스팟에 상기 DNA/RNA 혼성화체의 이중나선이 존재하는 것으로 결정하는 단계를 포함하는, 마이크로RNA 분석 방법
13 13
제12항에 있어서, 상기 분석 방법은 상기 시료 내 이중나선의 개수를 카운팅하여 표적 miRNA을 정량 하는 단계를 더욱 포함하는 분석 방법
14 14
제13항에 있어서, 상기 이중나선의 개수를 카운팅하는 단계는,스팟의 단위 면적당 캡쳐된 이중나선 개수를 카운팅하는 단계; 및하기의 식 1에 의하여 시료 내 총 이중나선 개수를 산출하는 단계를 포함하는, 분석 방법
15 15
제12항에 있어서, 상기 이중나선이 존재하는 것으로 결정하는 단계는동역학적 거동 너비가 8nm 픽셀인 경우, 결합힘이 관찰되는 4개의 인접한 픽셀; 또는동역학적 거동 너비가 10nm 픽셀인 경우 결합힘이 관찰되는 3개의 인접한 픽셀의 위치에 이중나선이 있는 것으로 결정하는 것인, 분석 방법
16 16
제12항에 있어서, 상기 시료 내 표적 miRNA의 농도는 5×10-20 내지 2×10-13M인 것인, 분석 방법
17 17
제12항에 있어서, 상기 형성된 프로브 DNA 스팟의 크기는 하기의 식 2 및 식 3으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상에 의하여 산출되는 것인, 분석 방법:[식 2]프로브 DNA 스팟 지름(νm) = (마이크로 RNA 농도([M]) × 1019 / 5)0
18 18
제12항에 있어서 상기 기판은, 유리, 금속, 플라스틱, 실리콘, 실리케이트, 세라믹, 반도체, 합성 유기 금속, 합성 반도체 및 합금으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상인 것인, 분석 방법
19 19
제12항에 있어서, 상기 마이크로 RNA는 DNA/RNA 혼성화체가 형성된 후 혼성화되지 않은 영역의 뉴클레오타이드 개수가 0 내지 6개인 것인, 분석 방법
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US20170233799 US 미국 FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US2017233799 US 미국 DOCDBFAMILY
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