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(a) 배양된 장 세포가 배치되고 유입되는 물질이 상기 장 세포를 통과하도록 형성되는 장 채널부, 및 배양된 간 세포가 배치되고 상기 장 세포를 통과한 물질 중 적어도 일부가 상기 간 세포와 접촉되도록 상기 장 채널부와 연결되는 간 채널부를 포함하는 생체 모사 마이크로 칩을 준비하는 단계; 및(b) 유리지방산(FFA(free fatty acid))이 상기 장 세포를 통과하여 상기 간 세포에 공급되어 인공 지방간이 형성되도록, 유리지방산을 상기 장 채널부에 유입시키는 단계를 포함하는, 인공 지방간 형성 방법
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제1항에 있어서,상기 (b) 단계는, 상기 장 채널부와 상기 간 채널부를 소정의 시간 동안 유리지방산이 포함된 용액으로 처리하는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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제2항에 있어서,상기 유리지방산이 포함된 용액은, 인체에서 지방이 위를 지나 췌장리파제(pancreatic lipase)에 의해 분해되어 장으로 유입되는 흐름이 모사되도록, 올레인산(oleic acid)과 팔미트산(palmitic acid)을 혼합하여 제조되는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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제3항에 있어서,상기 유리지방산이 포함된 용액은, 올레인산(oleic acid)과 팔미트산(palmitic acid)을 혼합한 다음 Sodium taurocholate를 첨가하고 쉐이킹(shaking)하여 마이셀(micelle)을 형성하는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계와 상기 (b) 단계 사이에,(c) 상기 장 세포 및 상기 간 세포에 대해 starvation을 수행하는 단계를 포함하는, 인공 지방간 형성 방법
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제5항에 있어서,상기 (c) 단계는, 세포 주기가 동기화되고 세포 증식이 제한되도록 FBS를 포함하지 않고 BSA 및 P/S를 첨가한 DMEM으로 starvation을 수행하는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 생체 모사 마이크로 칩은 상기 간 채널부에서 간 세포가 위치하는 간 챔버와 연결되는 지방세포 챔버를 포함하도록 준비되고,상기 지방세포 챔버에는 배양된 지방세포가 구비되는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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제7항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 간 세포의 시딩(seeding)은 상기 장 세포가 배양되고 나서 상기 간 세포가 포함된 용액이 상기 간 챔버로 공급되어 이루어지고, 상기 지방세포의 시딩은 상기 장 세포가 배양되고 나서 상기 지방세포가 포함된 용액이 상기 지방세포 챔버로 공급되어 이루어지는 것인, 인공 지방간 형성 방법
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(a) 제1항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여, 인공 지방간이 형성된 지방간 칩을 제조하는 단계; 및(b) 상기 인공 지방간을 형성한 간 세포를 분석하는 단계를 포함하는, 지방간 분석 방법
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제9항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 생체 모사 마이크로 칩은,베이스 층;상기 베이스 층 상에 적층되고 상기 간 채널부가 형성되는 간 층;상기 간 층 상에 적층되고 상기 장 채널부가 형성되는 장 층; 및상기 장 층 상에 적층되고 상기 간 채널부와 연결되는 간 리저버 및 상기 장 채널부와 연결되는 장 리저버가 형성되는 리저버 층을 포함하되,상기 간 채널부는 간 세포가 배치되는 간 챔버를 포함하고,상기 장 채널부는 상기 간 챔버와 상측으로 연결되는 장 챔버를 포함하며,상기 장 세포는 상기 간 층과 상기 장 층 사이에 개재되는 멤브레인 상에 직접적으로 또는 간접적으로 안착되어 상기 장 챔버에 배치되는 것인, 지방간 분석 방법
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제10항에 있어서,상기 (a) 단계와 상기 (b) 단계 사이에,(c) 상기 간 세포를 고정하는 단계; 및(d) 상기 간 세포를 염색하는 단계를 포함하는, 지방간 분석 방법
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제11항에 있어서,상기 (c) 단계는,(c1) 상기 생체 모사 마이크로 칩에서 상기 리저버 층, 상기 장 층 및 상기 멤브레인을 분리하고, 리저버 홀이 형성된 리저버 유닛을 상기 리저버 홀이 상기 간 챔버와 상측으로 연결되도록 상기 간 층 상에 배치하는 단계; 및(c2) 상기 리저버 유닛을 통해 상기 간 챔버를 fixative 용액으로 처리하고 워싱(washing) 및 건조하는 단계를 포함하는 것인, 지방간 분석 방법
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제12항에 있어서,상기 (c2) 단계에서, 상기 fixative 용액은 포름알데하이드(Formaldehyde) 40 wt% 와 PBS가 wt% 기준 1:10 농도로 희석된 것인, 지방간 분석 방법
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제11항에 있어서,상기 (d) 단계는 Oil red O working solution으로 상기 간 세포를 염색하고, 상기 (b) 단계는 상기 간 채널부를 소정의 시간 동안 dye extraction solution으로 처리하여 상기 간 세포에 대해 소정의 파장으로 흡광도를 측정하는 것인, 지방간 분석 방법
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제1항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여 제조되는 지방간 칩으로서,상기 생체 모사 마이크로 칩을 포함하되,상기 간 세포는 상기 장 세포를 통과하여 공급된 유리지방산에 의해 지방이 축적되는 것인, 지방간 칩
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제7항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여 제조되는 지방간-지방세포 칩으로서,상기 생체 모사 마이크로 칩을 포함하되,상기 간 세포에는 상기 장 세포를 통과하여 공급된 유리지방산에 의해 지방이 축적되고,상기 생체 모사 마이크로 칩은 상기 간 채널부와 연결되는 지방세포 챔버를 더 포함하는 것인, 지방간-지방세포 칩
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