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다중 리얼타임 PCR (multiplex realtime PCR)을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트로서,살모넬라 갈리나룸의 glgC(glucose-1-phosphate adenylyltransferase) 유전자를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 및 프로브의 조합으로서, 서열번호 1 및 2의 프라이머 쌍과, 서열번호 3의 올리고뉴클레오티드 또는 이와 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브와의 제1 조합과,살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC(ornithine decarboxylase) 유전자를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 및 프로브의 조합으로서, 서열번호 7 및 8의 프라이머 쌍과, 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드 또는 이와 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브와의 제2 조합과, 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 및 프로브의 조합으로서, 서열번호 10 및 11의 프라이머 쌍과, 서열번호 12의 올리고뉴클레오티드 또는 이와 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브와의 제3 조합과,살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN (type III secretion system ATPase) 유전자를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 및 프로브의 조합으로서, 서열번호 4 및 5의 프라이머 쌍과, 서열번호 6의 올리고뉴클레오티드 또는 이와 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브와의 제4 조합을 포함하고,상기 프라이머 및 프로브의 조합들을 구성하는 각 프로브는 각기 서로 다른 파장에서 검출할 수 있는 표지물질로 표지되며,1개의 반응 용기에 상기 프라이머 및 프로브의 조합들 모두가 포함된 다중 리얼타임 PCR을 수행하기 위해 제공되고,다중 리얼타임 PCR 결과, 상기 프라이머 및 프로브의 조합들은 교차반응없이 각각 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자를 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트
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제1항에 있어서,DNA 중합효소, dNTPs 및 PCR 완충용액을 더 포함하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트
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제1항에 있어서,상기 표지물질은 상기 프라이머 및 프로브의 각 조합을 구성하는 프로브의 한쪽 말단에 표지되는 것을 특징으로 하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트
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검체로부터 유전자 샘플을 준비하는 단계와, 청구항 제1항, 제3항 또는 제4항 중 어느 한 항에 기재된 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트를 이용하여, 상기 유전자 샘플을 다중 리얼타임(real-time) PCR로 증폭하는 단계와, 다중 리얼타임 PCR 결과에 기초하여 상기 검체 내의 살모넬라 감염증 원인균을 검출하는 단계를 포함하고, 다중 리얼타임 PCR 결과, 상기 프라이머 및 프로브의 조합들은 교차반응없이 각각 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자를 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 방법
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제5항에 있어서,다중 리얼타임 PCR 결과, 상기 검체 내에 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자가 검출되고, 또한 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자가 검출되는 경우에는 상기 검체는 살모넬라 갈리나룸에 의해 감염된 것으로 결정하고, 상기 검체 내에 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자는 검출되지만, 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자가 검출되지 않는 경우에는 상기 검체는 살모넬라 풀로룸에 의해 감염된 것으로 결정하는 것을 특징으로 하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 방법
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제6항에 있어서,증폭 전, 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자의 카피수를 알고 있는 유전자 샘플인 양성 표준자를, 청구항 제1항, 제3항 또는 제4항 중 어느 한 항에 기재된 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 키트와, 증폭되는 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자와 관련하여 유전자 증폭량을 나타내는 표지물질을 이용하여 다중 리얼타임(real-time) PCR로 증폭하는 단계와, 상기 양성 표준자의 전체 PCR 증폭 기간에 대한 상기 표지물질의 형광세기의 변화를 측정하고, 일정한 형광세기에 도달하는 PCR 반응회수(Cp값 또는 Ct값)를 분석하는 단계와,상기 표지물질의 형광세기의 변화를 측정하여 얻어진 표준곡선으로부터 상기 양성 표준자의 카피수와, Cp값 또는 Ct값을 대응시키는 단계와, 상기 검체의 유전자 샘플 내에 존재하는 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자 각각의 전체 PCR 증폭 기간에 대한 상기 표지물질의 형광세기의 변화를 측정하고, 일정한 형광세기에 도달하는 PCR 반응회수(Cp값 또는 Ct값)를 분석하는 단계와, 상기 검체의 유전자 샘플 내에 존재하는 상기 살모넬라 갈리나룸의 glgC 유전자, 상기 살모넬라 갈리나룸 및 살모넬라 풀로룸의 speC 유전자, 상기 살모넬라 티피무리움의 fljB 유전자, 및 상기 살모넬라 속의 살모넬라 타입 III ssaN 유전자 각각을 PCR 증폭하여 얻은 Cp값 또는 Ct값을 상기 양성 표준자의 카피수에 대응시켜, 상기 검체 내의 살모넬라 감염증 원인균 감염 여부를 정량적으로 측정하는 단계를 더 포함하는, 다중 리얼타임 PCR을 이용한 살모넬라 감염증 원인균 검사 방법
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