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N-당사슬 이성질체의 상대정량을 이용한 질병 스크리닝 방법

  • 기술번호 : KST2020002336
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 과제: 종래 당사슬 조성의 차이를 이용하여 질병 유무를 확인하는 방법은 각 질병에 특이적인 당사슬 조성이 많지 않으며, 분석에 시간이 많이 소요되는 문제점이 있다. 과제해결방법: 본 발명은 당사슬 조성이 동일하더라도 정량값에 차이를 보이는 당사슬 이성질체들이 존재함을 밝혀내어 이를 특정 질병의 마커로 이용할 수 있음을 밝혔다. 본 발명은 선택적으로 유리된 체액 내 N-당사슬 중 시알산 (NeuAc)을 함유한 당사슬을 분리·농축한 다음, 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 질량분석하여 얻어진 각 당사슬 이성질체 정량 값의 비율을 확인, 비교하여 특정 질병에 걸렸는지를 확인하는 스크리닝 방법에 관한 것이다.
Int. CL G01N 30/88 (2006.01.01) G01N 30/06 (2006.01.01)
CPC G01N 30/88(2013.01) G01N 30/88(2013.01) G01N 30/88(2013.01) G01N 30/88(2013.01) G01N 30/88(2013.01) G01N 30/88(2013.01)
출원번호/일자 1020180099334 (2018.08.24)
출원인 충남대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2020-0027064 (2020.03.12) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호 1020200028111;
심사청구여부/일자 Y (2018.08.24)
심사청구항수 9

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김재한 대전광역시 유성구
2 서나리 경기도 수원시 장안구
3 안현주 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 강성혜 대한민국 대전 유성구 지족로***번길 **, ***-*호 (지족동, 성훈프라자)(아이앤아이특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2018.08.24 수리 (Accepted) 1-1-2018-0841985-19
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2018.08.27 수리 (Accepted) 1-1-2018-0845368-41
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2019.02.14 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2019.04.11 수리 (Accepted) 9-1-2019-0017250-18
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2019.10.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0725352-11
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2019.10.31 수리 (Accepted) 1-1-2019-1115119-81
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2019.10.31 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-1115120-27
8 거절결정서
Decision to Refuse a Patent
2020.01.06 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0012533-79
9 [법정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
2020.02.05 수리 (Accepted) 1-1-2020-0121107-19
10 법정기간연장승인서
2020.02.05 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2020-0020315-12
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2020.03.06 수리 (Accepted) 1-1-2020-0238481-80
12 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application
2020.03.06 수리 (Accepted) 1-1-2020-0238942-26
13 [명세서등 보정]보정서(재심사)
Amendment to Description, etc(Reexamination)
2020.03.06 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2020-0238471-23
14 등록결정서
Decision to Grant Registration
2020.03.12 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0189052-14
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번호 청구항
1 1
가) 특정 질병 환자군과 정상 대조군으로부터 각각 체액을 얻고, 체액 내 단백질을 변성하여 시료를 준비하는 단계;나) 상기 시료에 효소를 처리하여 시료로부터 N-당사슬을 분리하는 단계;다) 분리한 N-당사슬을 정제 또는 농축하는 단계;라) 정제 또는 농축된 N-당사슬을 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 아래 a) 내지 d) 단계를 거쳐 질량분석하는 단계; a) 농도구배 용리를 이용하여 다공성 흑연화 탄소 충전 컬럼으로 시알산 함유 N-당사슬을 동일한 당 조성 및 동일한 분자량을 갖는 시알산 함유 N-당사슬 별로 각각 분리하는 단계; b) 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기의 첫 번째 4중극 (quadrupole)에서 상기 a) 단계에서 분리한 각 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온 중 하나를 선택하여 통과시키는 단계; c) 첫 번째 4중극을 통과한 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온을 두 번째 4중극인 충돌 셀에서 특정 에너지를 가하여 단편화하여 단편 이온 (fragment ion)을 생성하는 단계; 및 d) 상기 충돌 셀에서 생성된 단편 이온 중 표적 물질에 특이적인 단편 이온만 세 번째 4중극을 통과시켜 검출하여 시알산 함유 N-당사슬의 질량분석 크로마토그램을 얻는 단계;마) 상기 라)의 d) 단계에서 얻은 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체 중 환자군과 정상 대조군 간 차이를 보이는 이성질체의 피크 면적 비율을 비교하는 단계; 및바) 비교 결과 환자군과 정상 대조군 간에 피크 면적 비율의 P-값이 10-20 이하로 유의한 차이가 있는 경우 상기 크로마토그램 피크를 상기 특정 질병의 마커로 선정하는 단계;를 포함하며,상기 마) 단계의 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체는 N-당사슬 내에서 시알산의 결합 위치 및 시알산의 글리코시드 연결방식 중 하나 이상에 차이가 있는 것임을 특징으로 하는, 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
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삭제
3 3
청구항 1에 있어서,상기 바) 단계 이후 사) 시험 대상인의 체액을 채취하여 상기 가) 내지 라) 단계를 수행하고, 질량분석으로 얻은 크로마토그램 피크 중 상기 바) 단계에서 특정 질병의 마커로 선정된 크로마토그램 피크의 면적 비율을 정상 대조군의 값과 비교하여 유의한 차이가 있는 경우 시험 대상인이 특정 질병에 걸린 것으로 확인하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
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청구항 1에 있어서,상기 나) 단계는a) 시료에 PNGase F 효소를 16~24시간 처리하여 N-당사슬을 분리하는 단계;b) a) 단계를 거친 시료 내의 단백질을 침전하는 단계; 및c) 단백질을 침전시킨 시료를 원심분리하고 상층액을 얻는 단계;를 순차적으로 포함함을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
5 5
삭제
6 6
청구항 1에 있어서,상기 b) 단계의 시알산 함유 N-당사슬은 조성이 Hex5HexNAc4NeuAc1인 단일 시알산화 복합형 N-당사슬, 조성이 Hex5HexNAc4Fuc1NeuAc1인 단일 시알산화 단일 퓨코실화 복합형 N-당사슬 및 조성 Hex5HexNAc4NeuAc2인 이중 시알산화 복합형 N-당사슬 중 하나인 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
7 7
청구항 1에 있어서,상기 특정 질병은 자가면역질환임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
8 8
청구항 7에 있어서,상기 자가면역질환은 베체트병임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
9 9
청구항 1에 있어서,상기 d) 단계의 표적 물질에 특이적인 단편 이온은 이론적 분자량 203
10 10
청구항 1에 있어서,상기 마) 단계의 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체는 Hex5HexNAc4NeuAc1에 해당하는 6개의 이성질체, Hex5HexNAc4Fuc1NeuAc1에 해당하는 3개의 이성질체 및 Hex5HexNAc4NeuAc2에 해당하는 2개의 이성질체 중 선택된 하나 이상의 이성질체인 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
11 11
청구항 1에 있어서,상기 특정 질병이 베체트병인 경우,상기 바) 단계의 마커는 N-당사슬 조성 Hex5HexNAc4NeuAc1에서 말단 시알산이 말단 갈락토오즈와 (α 2, 3) 결합으로 연결된 이성질체 중 단당류의 헤미아세탈형 고리구조의 형성으로 인해 생기는 아노머 이성질체 두 개 및 당사슬 조성 Hex5HexNAc4NeuAc2인 이중 시알산화 복합형 N-당사슬 (Di-sialylated complex-type N-glycan) 이성질체 중 말단 시알산 두 개가 두 개의 말단 갈락토오즈와 각각 (α 2, 3) 결합과 (α 2, 6) 결합으로 연결된 이성질체 중 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 농림축산식품부 서울대학교 연구개발사업 지정공모과제 글라이코믹스를 활용한 반려동물 관절염 조기진단을 위한 유도 바이오마커 개발