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N-당사슬 이성질체의 상대정량을 이용한 질병 스크리닝 방법

  • 기술번호 : KST2020002676
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 과제: 종래 당사슬 조성의 차이를 이용하여 질병 유무를 확인하는 방법은 각 질병에 특이적인 당사슬 조성이 많지 않으며, 분석에 시간이 많이 소요되는 문제점이 있다. 과제해결방법: 본 발명은 당사슬 조성이 동일하더라도 정량값에 차이를 보이는 당사슬 이성질체들이 존재함을 밝혀내어 이를 특정 질병의 마커로 이용할 수 있음을 밝혔다. 본 발명은 선택적으로 유리된 체액 내 N-당사슬 중 시알산 (NeuAc)을 함유한 당사슬을 분리·농축한 다음, 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 질량분석하여 얻어진 각 당사슬 이성질체 정량 값의 비율을 확인, 비교하여 특정 질병에 걸렸는지를 확인하는 스크리닝 방법에 관한 것이다.
Int. CL G01N 30/88 (2006.01.01) G01N 30/72 (2006.01.01) G01N 30/06 (2006.01.01)
CPC
출원번호/일자 1020200028111 (2020.03.06)
출원인 충남대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2020-0028917 (2020.03.17) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 보정승인간주
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자 10-2018-0099334 (2018.08.24)
관련 출원번호 1020180099334
심사청구여부/일자 Y (2020.03.06)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김재한 대전광역시 유성구
2 안현주 대전광역시 유성구
3 서나리 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 강성혜 대한민국 대전 유성구 지족로***번길 **, ***-*호 (지족동, 성훈프라자)(아이앤아이특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.03.06 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0239038-45
2 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application		 2020.03.06 수리 (Accepted) 1-1-2020-0238942-26
3 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2020.03.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0201549-87
4 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2020.03.19 수리 (Accepted) 1-1-2020-0289387-70
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.03.19 무효 (Invalidation) 1-1-2020-0289388-15
6 보정요구서
Request for Amendment		 2020.03.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2020-0045226-76
7 [지정기간단축]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Reduction of Designated Period] Request for Extension of Period (Reduction, Expiry Reconsideration)		 2020.03.25 수리 (Accepted) 1-1-2020-0310663-61
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.03.25 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0310687-56
9 무효처분통지서
Notice for Disposition of Invalidation		 2020.03.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2020-0046175-14
10 등록결정서
Decision to grant		 2020.04.03 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0245160-40
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
가) 특정 질병 환자군과 정상 대조군으로부터 각각 체액을 얻고, 체액 내 단백질을 변성하여 시료를 준비하는 단계;나) 상기 시료에 효소를 처리하여 시료로부터 N-당사슬을 분리하는 단계;다) 분리한 N-당사슬을 정제 또는 농축하는 단계; 라) 정제 또는 농축된 N-당사슬을 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 아래 a) 내지 d) 단계를 거쳐 질량분석하는 단계; a) 농도구배 용리를 이용하여 다공성 흑연화 탄소 충전 컬럼으로 시알산 함유 N-당사슬을 동일한 당 조성 및 동일한 분자량을 갖는 시알산 함유 N-당사슬 별로 각각 분리하는 단계; b) 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기의 첫 번째 4중극 (quadrupole)에서 상기 a) 단계에서 분리한 각 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온 중 하나를 선택하여 통과시키는 단계; c) 첫 번째 4중극을 통과한 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온을 두 번째 4중극인 충돌 셀에서 특정 에너지를 가하여 단편화하여 단편 이온 (fragment ion)을 생성하는 단계; 및 d) 상기 충돌 셀에서 생성된 단편 이온 중 표적 물질에 특이적인 단편 이온만 세 번째 4중극을 통과시켜 검출하여 시알산 함유 N-당사슬의 질량분석 크로마토그램을 얻는 단계;마) 상기 라)의 d) 단계에서 얻은 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체 중 환자군과 정상 대조군 간 차이를 보이는 이성질체의 피크 면적 비율을 비교하는 단계; 및바) 비교 결과 환자군과 정상 대조군 간에 특정 N-당사슬 크로마토그램 피크 정량 값이 유의한 차이가 있는 경우 상기 특정 N-당사슬 크로마토그램 피크를 상기 특정 질병의 마커로 선정하는 단계;를 포함하며,상기 b) 단계의 시알산 함유 N-당사슬은 당사슬 조성이 Hex5HexNAc4NeuAc1인 단일 시알산화 복합형 N-당사슬, 당사슬 조성이 Hex5HexNAc4Fuc1NeuAc1인 단일 시알산화 단일 퓨코실화 복합형 N-당사슬 및 당사슬 조성 Hex5HexNAc4NeuAc2인 이중 시알산화 복합형 N-당사슬 중 하나인 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
2 2
삭제
3 3
청구항 1에 있어서,상기 바) 단계 이후 사) 시험 대상인의 체액 시험 시료를 채취하여 상기 가) 내지 라) 단계를 수행하고, 질량분석으로 얻은크로마토그램 피크 중 상기 바) 단계에서 특정 질병의 마커로 선정된 크로마토그램 피크의 면적 비율을 정상 대조군의 값과 비교하여 유의한 차이가 있는 경우 시험 대상인이 특정 질병에 걸린 것으로 확인하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
4 4
청구항 1에 있어서,상기 나) 단계는a) 시료에 PNGase F 효소를 16~24시간 처리하여 N-당사슬을 분리하는 단계;b) a) 단계를 거친 시료 내의 단백질을 침전하는 단계; 및c) 단백질을 침전시킨 시료를 원심분리하고 상층액을 얻는 단계;를 순차적으로 포함함을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
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청구항 1에 있어서,상기 특정 질병은 자가면역질환임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
6 6
청구항 5에 있어서,상기 자가면역질환은 베체트병임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
7 7
삭제
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청구항 1에 있어서,상기 마) 단계의 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체는 Hex5HexNAc4NeuAc1에 해당하는 6개의 이성질체, Hex5HexNAc4Fuc1NeuAc1에 해당하는 3개의 이성질체 및 Hex5HexNAc4NeuAc2에 해당하는 2개의 이성질체 중 선택된 하나 이상의 이성질체인 것을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
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청구항 1에 있어서,상기 특정 질병이 베체트병인 경우,상기 바) 단계의 마커는 N-당사슬 조성 Hex5HexNAc4NeuAc1에서 말단 시알산이 말단 갈락토오즈와 (α 2, 3) 결합으로 연결된 이성질체 중 단당류의 헤미아세탈형 고리구조의 형성으로 인해 생기는 아노머 이성질체 두 개 및 당사슬 조성 Hex5HexNAc4NeuAc2인 이중 시알산화 복합형 N-당사슬 (Di-sialylated complex-type N-glycan) 이성질체 중 말단 시알산 두 개가 두 개의 말단 갈락토오즈와 각각 (α 2, 3) 결합과 (α 2, 6) 결합으로 연결된 이성질체 중 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 시알산 함유 N-당사슬 크로마토그램 피크를 이용한 질병 스크리닝 방법
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 농림축산식품부 충남대학교 농생명산업기술개발사업 글라이코믹스를 활용한 반려동물 관절염 조기진단을 위한 유도 바이오마커 개발