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다음 단계를 포함하는 면역독소(immunotoxin)의 제조방법:(a) 아미노산 잔기 일부가 시스테인으로 치환된 면역글로불린(immunoglobulin) 변이체를 환원 및 재산화시킨 후 링커(linker)와 반응시키는 단계; 및(b) 상기 링커가 결합된 면역글로불린 변이체와 비천연 아미노산(unnatural amino acid)이 도입된 단백질 PE24를 접합시켜 면역독소를 생성하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 링커가 결합된 면역글로불린 변이체와 비천연 아미노산이 도입된 단백질 PE24가 클릭 반응(Click reaction)에 의해 위치-특이적(site-specific)으로 결합되는 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 면역글로불린 변이체는 전장(full-length) 단일클론 IgG인 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 면역글로불린 변이체는 서열번호 18로 표시되는 중쇄 불변영역 아미노산 서열의 61번째, 91번째, 273번째, 303번째, 305번째 아미노산; 서열번호 22로 표시되는 중쇄 불변영역 아미노산 서열의 61번째, 91번째, 272번째, 302번째, 304번째 아미노산; 및 서열번호 20으로 표시되는 경쇄 불변영역 아미노산 서열의 91번째, 93번째 아미노산;으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 아미노산이 시스테인으로 치환된 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 시스테인 치환은 프라이머를 이용한 PCR 반응을 통해 수행하는 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제5항에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 1 내지 16으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 환원은 트리스(2-카복시에틸)포스핀(Tris(2-carboxyethyl)phosphine; TCEP)을 사용하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 재산화는 디하이드로아스코르빈산(Dehydroascorbic acid; dhAA)을 사용하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 링커는 말레이미드(maleimide)-PEG-DBCO 링커인 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 PE24는 탈면역화된(deimmunized) 슈도모나스 외독소(Pseudomonas Exotoxin) A인 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제10항에 있어서, 상기 PE24는 슈도모나스 외독소(Pseudomonas Exotoxin) A에서 도메인 Ⅰa가 결실되고, 퓨린 절단 부위(furin-cleavable motif)를 제외한 도메인 Ⅱ가 결실되며, 7개의 돌연변이(R427A, R456A, D463A, R467A, R490A, R505A 및 R538A)를 포함하는 독소의 도메인 Ⅲ를 포함하고, 추가로 His 6 tags 및 트롬빈(Thrombin) 절단 부위가 도입된 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 비천연 아미노산은 파라아지도페닐알라닌(p-azidophenylalanine)인 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 면역글로불린은 트라스투주맙(Trastuzumab) 또는 세툭시맙(Cetuximab)인 것을 특징으로 하는 면역독소의 제조방법
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아미노산 잔기 일부가 시스테인으로 치환된 면역글로불린(immunoglobulin) 변이체가 링커를 매개로 비천연 아미노산(unnatural amino acid)이 도입된 단백질 PE24과 접합되어 있는 면역독소(immunotoxin)
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제14항에 있어서, 상기 면역글로불린 변이체는 서열번호 18로 표시되는 중쇄 불변영역 아미노산 서열의 61번째, 91번째, 273번째, 303번째, 305번째 아미노산; 서열번호 22로 표시되는 중쇄 불변영역 아미노산 서열의 61번째, 91번째, 272번째, 302번째, 304번째 아미노산; 및 서열번호 20으로 표시되는 경쇄 불변영역 아미노산 서열의 91번째, 93번째 아미노산;으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 아미노산이 시스테인으로 치환된 것을 특징으로 하는 면역독소
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제14항에 있어서, 상기 링커는 말레이미드(maleimide)-PEG-DBCO 링커인 것을 특징으로 하는 면역독소
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제14항에 있어서, 상기 PE24는 탈면역화된(deimmunized) 슈도모나스 외독소(Pseudomonas Exotoxin) A인 것을 특징으로 하는 면역독소
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제17항에 있어서, 상기 PE24는 슈도모나스 외독소(Pseudomonas Exotoxin) A에서 도메인 Ⅰa가 결실되고, 퓨린 절단 부위(furin-cleavable motif)를 제외한 도메인 Ⅱ가 결실되며, 7개의 돌연변이(R427A, R456A, D463A, R467A, R490A, R505A 및 R538A)를 포함하는 독소의 도메인 Ⅲ를 포함하고, 추가로 His 6 tags 및 트롬빈(Thrombin) 절단 부위가 도입된 것을 특징으로 하는 면역독소
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제14항에 있어서, 상기 면역글로불린은 트라스투주맙(Trastuzumab) 또는 세툭시맙(Cetuximab)인 것을 특징으로 하는 면역독소
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제14항 내지 제19항에 따른 면역독소를 포함하는 암 치료용 조성물
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제20항에 있어서, 상기 암은 유방암, 대장암, 비소세포폐암 또는 두경부암인 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물
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