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인간세포의 게놈 내 하나 이상의 핫스팟(hot spots)에 목적 단백질을 암호화하는 유전자 서열을 삽입하는 단계를 포함하는, 목적 단백질의 발현 증진방법
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제1항에 있어서,상기 목적 단백질을 암호화하는 유전자 서열을 동시 또는 순차적으로 삽입하는 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제2항에 있어서, 상기 순차적인 삽입은 목적 단백질을 암호화하는 유전자 서열을 서로 다른 핫스팟에 각각 순차적으로 삽입하여 유전자 서열의 삽입 개수를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제1항에 있어서, 상기 핫스팟은 SEMA3A(서열번호 1), SEMA6A(서열번호 2), DCC(서열번호 3) GrikA1(서열번호 4) 또는 AAVS1(서열번호 5) 위치인 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제1항에 있어서, 상기 삽입은 크리스퍼-카스9(CRISPR-CAS9) 유전자 가위를 이용하는 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제1항에 있어서, 상기 삽입은 5'에서 3' 방향으로 선별 마커 유전자 서열, 프로모터 영역, 히스티딘 태그(His tag) 염기서열, 형광단백질 유전자 서열 및 목적 단백질 유전자의 암호화 서열을 포함하는 삽입서열이 상동 의존성 복구(Homology dependent repair) 또는 비상동 말단 연결 매개 녹인(non-homologous end joining mediated knock-in) 기작을 통해 인간 게놈의 핫스팟 내로 삽입되는 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제6항에 있어서, 상기 프로모터 영역은 CMV 프로모터 서열에 tetO(tetracycline operator) 서열이 결합된 것을 특징으로 하는, 발현 증진방법
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제1항 내지 제7항의 어느 한 항의 방법에 의해 목적 단백질의 발현량이 증진된, 인간세포주
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하기의 단계를 포함하는, 복합체 단백질의 생산방법:(a) 인간세포의 게놈 내 하나 이상의 핫스팟(hot spots)에 상기 복합체 단백질을 구성하는 서로 다른 서브 단백질을 암호화하는 각각의 유전자 서열을 삽입하는 단계; (b) 상기 각각의 유전자 서열이 삽입된 인간세포에서 각 서브 단백질의 발현을 유도하여 복합체 단백질을 수득하는 단계; 및(c) 상기 복합체 단백질을 정제하는 단계
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제9항에 있어서,상기 서로 다른 서브 단백질을 암호화하는 각각의 유전자 서열을 동시 또는 순차적으로 삽입하는 것을 특징으로 하는, 생산방법
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제9항에 있어서, 상기 핫스팟은 AAVS1(서열번호 5), SEMA6A(서열번호 2), DCC(서열번호 3) 또는 GrikA1(서열번호 4) 위치인 것을 특징으로 하는, 생산방법
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제9항에 있어서, 상기 단백질을 암호화하는 유전자 서열의 삽입은 크리스퍼-카스9(CRISPR-CAS9) 유전자 가위를 이용하는 것을 특징으로 하는, 생산방법
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제9항에 있어서, 상기 삽입은 5'에서 3' 방향으로 선별 마커 유전자 서열, 프로모터 영역, 히스티딘 태그(His tag) 염기서열, 형광단백질 유전자 서열 및 서로 다른 서브 단백질을 암호화하는 각각의 유전자 서열을 포함하는 삽입서열이 상동 의존성 복구(Homology dependent repair) 또는 비상동 말단 연결 매개 녹인(non-homologous end joining mediated knock-in) 기작을 통해 이루어지는 것을 특징으로 하는, 생산방법
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제13항에 있어서, 상기 프로모터 영역은 CMV 프로모터 서열에 tetO(tetracycline operator) 서열 결합된 것을 특징으로 하는, 생산방법
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제9항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 단백질의 발현 유도는 세포에 독시사이클린(Doxycyclin)을 처리함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는, 생산방법
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