1 |
1
1) 줄기세포를 완전 내배엽(definitive endoderm, DE) 세포 및 중내배엽(mesoendoderm) 세포를 포함하도록 분화시키는 단계;2) 상기 단계 1)의 완전 내배엽 세포 및 중내배엽 세포를 2차원 배양용기에서 배양하여 전방 전장 내배엽(anterior foregut endoderm, AFE) 세포로 분화시키는 단계;3) 상기 단계 2)의 AFE 세포를 2차원 배양용기에서 배양하는 단계; 및4) 상기 단계 3)의 배양된 세포를 3차원 배양용기에서 배양하는 단계;를 포함하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
2 |
2
제1항에 있어서, 상기 줄기세포는 배아 줄기세포(embryonic stem cell), 역분화 줄기세포(induced pluripotent stem cell) 또는 성체 줄기세포(adult stem cell)인, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
3 |
3
제1항에 있어서, 상기 단계 1)의 완전 내배엽 세포는 전체 세포 중 50 내지 90% 함유되는 것인, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
4 |
4
제1항에 있어서, 상기 단계 1)의 완전 내배엽 세포는 전체 세포 중 50 내지 80% 함유되는 것인, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
5 |
5
제1항에 있어서, 상기 단계 1)의 완전 내배엽 세포는 전체 세포 중 70 내지 80% 함유되는 것인, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
6 |
6
제1항에 있어서, 상기 단계 2)의 배양은 전방화(anteriorization) 배지에서 이루어지는 것인, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
7 |
7
제6항에 있어서, 상기 전방화 배지는 TGF-β(transforming growth factor beta) 신호전달 경로 억제제 및 Wnt 신호전달 경로 억제제를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
8 |
8
제7항에 있어서, 상기 TGF-β 신호전달 경로 억제제는 SB431542 또는 Noggin인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
9 |
9
제7항에 있어서, 상기 Wnt 신호전달 경로 억제제는 IWP-2, IWP-3 또는 IWP-4인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
10 |
10
제1항에 있어서, 상기 단계 3)의 배양은 마트리겔이 포함된 LO(Lung Organoid formation) 배지에서 이루어지는 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
11 |
11
제10항에 있어서, 상기 LO 배지는 GSK-3β(glycogen synthase kinase 3 beta) 억제제, 섬유아세포 성장 인자(fibroblast growth factor, FGF), 폐 분지형태 증식 억제제 및 폐포 재생 활성화제를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
12 |
12
제11항에 있어서, 상기 GSK-3β 억제제는 CHIR 99021인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
13 |
13
제11항에 있어서, 상기 섬유아세포 성장 인자는 FGF10 및 FGF7/KGF인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
14 |
14
제11항에 있어서, 상기 폐 분지형태 증식 억제제는 골형성 단백질(bone morphogenetic protein, BMP)인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
15 |
15
제11항에 있어서, 상기 폐포 재생 활성화제는 all-trans retinoic acid인 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
16 |
16
제1항에 있어서, 상기 단계 4)의 배양은 마트리겔이 포함되지 않은 LO(Lung Organoid formation) 배지에서 이루어지는 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
17 |
17
제1항에 있어서, 상기 단계 4)의 3차원 배양은 분화 15 내지 25일차부터 수행되는 것을 특징으로 하는, 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드의 제조방법
|
18 |
18
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 폐 오가노이드의 제조방법에 의해 제조된 폐포 대식세포를 포함하는 폐 오가노이드
|