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(ⅰ) 액티빈 A(activin A), CHIR99021, B27 및 LY294002을 포함하는 인간 유도만능 줄기세포(human induced pluripotent stem cells; iPSC)로부터 내배엽(definitive endoderm; DE)으로의 분화 유도용 조성물;(ⅱ) 액티빈 A(activin A) 및 B27을 포함하는 내배엽 세포로부터 원시 장관(primitive gut tube; PGT)으로의 분화 유도용 조성물;(ⅲ) B27, 돌소몰핀(dorsomorphin), 레티노산(retinoic acid), SB431542, FR180204 및 SANT-1을 포함하는 원시 장관으로부터 췌장 내배엽(pancreatic endoderm; PE)으로의 분화 유도용 조성물; 및 (ⅳ) B27, 포스콜린(forskolin), 덱사메타손(dexamethasone) 및 니코틴아미드(nicotinamide)을 포함하는 췌장 내배엽로부터 인슐린 생성 췌장 내분비 세포(endocrine pancrease; EP)로의 분화 유도용 조성물;로 구성된, 인간 유도만능 줄기세포(human induced pluripotent stem cells; iPSC) 유래 인슐린 생성 세포 분화 유도용 조성물
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제1항에 있어서, 상기 (ⅰ) 단계의 분화 유도용 조성물은 50 ~ 150 ng/mL 액티빈 A, 1 ~ 5 μM CHIR99021, 1 ~ 5% 1X B27, 및 15 ~ 25 μM LY294002을 포함하며, 상기 (ⅱ) 단계의 분화 유도용 조성물은 50 ~ 150 ng/mL 액티빈 A 및 1 ~ 5% 1X B27을 포함하며, 상기 (ⅲ) 단계의 분화 유도용 조성물은 1 ~ 5% 1X B27, 1 ~ 5 μM 돌소몰핀, 1 ~ 5 μM 레티노산, 5 ~ 15 μM SB431542, 1 ~ 5 μM FR180204 및 0
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제1항에 있어서, 상기 인간 유도만능 줄기세포는 섬유아세포(fibroblast) 유래이며, Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc 및 SSEA4를 발현하는 것을 특징으로 하는, 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포 분화 유도용 조성물
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제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포 분화 유도용 조성물을 유효성분으로 포함하는, 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포 분화 유도 배지
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제4항에 있어서, 상기 배지는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium), MEM(Minimal Essential Medium), 임프루브드 MEM(improved MEM), BME(Basal Medium Eagle), RPMI 1640(Roswell Park Memorial Institute medium 1640), 어드밴스드 RPMI 1640(Advanced RPMI1640), F-10, F-12, DMEM-F12, α-MEM(α-Minimal Essential Medium), G-MEM(Glasgow's Minimal Essential Medium) 및 IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포 분화 유도 배지
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(a) 인간 유도만능 줄기세포를 액티빈 A(activin A), CHIR99021, B27 및 LY294002이 포함된 배지에서 배양하여 내배엽으로 분화를 유도하는 단계;(b) 상기 (a) 단계에서 분화 유도된 내배엽을 액티빈 A(activin A) 및 B27이 포함된 배지에서 배양하여 원시 장관으로 분화를 유도하는 단계;(c) 상기 (b) 단계에서 분화 유도된 원시 장관을 B27, 돌소몰핀(dorsomorphin), 레티노산(retinoic acid), SB431542, FR180204 및 SANT-1이 포함된 배지에서 배양하여 췌장 내배엽으로 분화를 유도하는 단계; 및(d) 상기 (c) 단계에서 분화 유도된 췌장 내배엽을 B27, 포스콜린(forskolin), 덱사메타손(dexamethasone) 및 니코틴아미드(nicotinamide)이 포함된 배지에서 배양하여 인슐린 생성 가능한 췌장 내분비 세포로 분화를 유도하는 단계;를 포함하는, 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포의 분화 유도 방법
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제6항에 있어서, 상기 (a) 단계는 인간 유도만능 줄기세포를 50 ~ 150 ng/mL 액티빈 A, 1 ~ 5 μM CHIR99021, 1 ~ 5% 1X B27, 및 15 ~ 25 μM LY294002이 포함된 배지에서 배양하여 내배엽으로 분화를 유도하며, 상기 (b) 단계는 내배엽을 50 ~ 150 ng/mL 액티빈 A 및 1 ~ 5% 1X B27이 포함된 배지에서 배양하여 원시 장관으로 분화를 유도하며, 상기 (c) 단계는 원시 장관을 1 ~ 5% 1X B27, 1 ~ 5 μM 돌소몰핀, 1 ~ 5 μM 레티노산, 5 ~ 15 μM SB431542, 1 ~ 5 μM FR180204 및 0
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제6항에 있어서, 상기 (a) 단계의 인간 유도만능 줄기세포는 섬유아세포(fibroblast) 유래이며, Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc 및 SSEA4를 발현하는 것을 특징으로 하는, 인간 유도만능 줄기세포 유래 인슐린 생성 세포의 분화 유도 방법
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제6항 내지 제8항의 어느 한 항의 방법으로 제조된, 인슐린 생산 췌장 내분비 세포
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제9항의 인슐린 생산 췌장 내분비 세포를 유효성분으로 포함하는 당뇨병 치료용 약학적 조성물
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다음의 단계를 포함하는 인슐린의 대량 생산 방법:(a) 제9항의 인슐린 생산 췌장 내분비 세포를 배양하는 단계; 및(b) 상기 (a) 단계의 배양에 의한 배양물로부터 인슐린을 분리하는 단계
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