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BMP 수용체 유전자 BMPRIA 또는 BMPRII가 녹아웃(knock-out)된 형질전환 CHO 세포주
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제1항에 있어서, 상기 세포주는 BMPRIA 유전자의 2번째 엑손(exon)의 염기 서열에 변이가 일어난 것인, 세포주
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제1항에 있어서, 상기 세포주는 BMPRII 유전자의 2번째 내지 5번째 엑손의 염기 서열에 변이가 일어난 것인, 세포주
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1) BMP 수용체 유전자 BMPRIA 또는 BMPRII를 녹아웃시키는 벡터를 제조하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 벡터를 CHO 세포주에 도입하는 단계; 및3) 상기 단계 2)의 벡터가 도입된 CHO 세포주에서 BMP 수용체 유전자 BMPRIA 또는 BMPRII가 녹아웃된 세포주를 선별하는 단계;를 포함하는 BMP 수용체 유전자 BMPRIA 또는 BMPRII가 녹아웃된 형질전환 CHO 세포주의 제조방법
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제4항에 있어서, 상기 단계 1)의 벡터는 유전자 가위를 포함하는, 제조방법
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제4항에 있어서, 상기 단계 1)의 BMPRIA 유전자를 녹아웃시키는 벡터는 BMPRIA 유전자의 2번째 엑손의 염기 서열을 타겟으로 하는 sgRNA의 염기서열을 포함하는 벡터 및 Cas9 단백질을 암호화하는 염기서열을 포함하는 벡터인, 제조방법
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제4항에 있어서, 상기 단계 1)의 BMPRII 유전자를 녹아웃시키는 벡터는 BMPRII 유전자의 2번째 엑손의 염기 서열을 타겟으로 하는 sgRNA의 염기서열을 포함하는 벡터, 5번째 엑손의 염기 서열을 타겟으로 하는 sgRNA의 염기서열을 포함하는 벡터 및 Cas9 단백질을 암호화하는 염기서열을 포함하는 벡터인, 제조방법
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1) 제1항의 BMP 수용체 유전자 BMPRIA 또는 BMPRII가 녹아웃된 형질전환 CHO 세포주에 BMP4 단백질을 암호화하는 염기서열을 포함하는 벡터를 도입하는 단계; 2) 상기 단계 1)에서 제조한 세포주를 배양하는 단계; 및3) 상기 단계 2)에서 생산된 BMP4 단백질을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 BMP4 단백질의 생산 방법
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제8항에 있어서, 상기 단계 1)의 CHO 세포주는 DHFR(dihydrofolate reductase, 디하이드로폴레이스 환원효소) 유전자가 녹아웃된, BMP4 단백질의 생산 방법
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제8항에 있어서, 상기 단계 1)의 벡터는 DHFR 단백질을 암호화하는 염기서열을 더 포함하는, BMP4 단백질의 생산 방법
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제8항에 있어서, 상기 단계 2)의 배양은 MTX(methotrexate, 메소트렉세이트)를 처리하여 수행되는, BMP4 단백질의 생산 방법
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