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표적 유전자에 특이적인 가이드 RNA(sgRNA) 및 Cas 단백질을 포함하는 반응 혼합물과 미세 금속입자를 혼합하여 리보핵산단백질(ribonucleoprotein, RNP)이 표면에 코딩된 미세 금속입자를 포함하는 RNP-전달용조성물을 준비하는 것;상기 RNP-전달용조성물을 마크로-캐리어 디스크 상에서 건조시키는 것; 및 파열 디스크(rupture disk)에 500 psi 이상의 압력을 가하여 상기 RGEN RNP 복합체가 표면에 코팅된 미세 금속입자를 테트라셀미스 속 미세조류 세포로 발사하는 것; 그 유전자총을 이용하여 테트라셀미스 속 미세조류 세포로 도입하는 것;을 포함하는 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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제1항에 있어서, 상기 교정방법은 RGEN RNP 복합체가 표면에 코팅된 미세 금속입자가 전달된 세포를 2 내지 5일 동안 인큐베이션한 후 미세조류 세포들을 수확하는 것을 더 포함하는, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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제1항에 있어서,상기 RNP-전달용조성물을 준비하는 단계는 제1 표적 유전자에 특이적인 가이드 RNA 및 Cas 단백질을 포함하는 제1 반응 혼합물;과 제2 표적 유전자에 특이적인 가이드 RNA 및 Cas 단백질을 포함하는 제2 반응 혼합물을 미세 금속입자와 혼합하여 2개 이상의 리보핵산단백질(RNP)가 코팅된 미세 금속입자를 포함하는 RNP-전달용조성물을 준비하는 것인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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제1항에 있어서,상기 반응 혼합물은 표적 유전자에 특이적인 가이드 RNA(sgRNA), Cas 단백질, 및 반응완충액을 포함하고, 상기 반응완충액은 양쪽 이온성 완충제, 염화나트륨(NaCl), 및 염화마그네슘(MgCl2)를 포함하며, pH는 6
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제4항에 있어서, 상기 반응 혼합물 10 μL에 대하여 표적 유전자에 특이적인 가이드 RNA(sgRNA) 1 내지 5 ug, Cas 단백질 1 내지 5 ug, 반응완충액 0
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제4항에 있어서,상기 반응완충액은 킬레이트제를 더 포함하고, 양쪽 이온성 완충제 10mM 내지 50mM, 염화나트륨(NaCl) 50 내지 200mM, 염화마그네슘(MgCl2) 2
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제1항에 있어서, 상기 압력은 1,000 내지 1,500 psi인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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제1항에 있어서, 금속입자 발사 시 정지스크린(stop sceen)과 테트라셀미스 미세조류 세포를 포함하는 세포 접시(cell plate)와의 거리는 8cm 내지 10cm인 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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제1항에 있어서,상기 마크로-캐리어 디스크 상에 5 내지 20μL의 RNP-전달용조성물을 건조하는 것인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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10
제1항에 있어서, 반응 혼합물과 미세 금속입자를 1 내지 2 : 1의 부피비로 혼합하는 것인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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11
제1항에 있어서,상기 금속입자는 텅스텐 또는 금인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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12
제1항에 있어서,상기 발사는 1 내지 10회 수행하는 것인, 테트라셀미스 속 미세조류의 유전자 교정방법
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13
SEQ ID No
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14
제13항에 있어서, 상기 변이체는 SEQ ID No: 5의 AGP 변이 유전자를 포함하는 테트라셀미스 속 변이체
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제13항에 있어서,기탁번호 KCTC 13787BP이고, 전분 생산능을 갖지않고, 야생형과 비교해서 개선된 지질 생산능을 갖는 테트라셀미스 TspAGP-M1인 테트라셀미스 속 변이체
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제15항에 있어서,상기 테트라셀미스 TspAGP-M1은 C16:0과 C18:1 지방산 생산능이 야생형 균주와 비교해서 개선된 것인, 테트라셀미스 속 변이체
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제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 테트라셀미스 속 변이체를 배양하여 지질을 축적시키는 단계; 및 배양물로부터 축적된 지질을 단리시키는 단계를 포함하는 바이오에너지 생산방법
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제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 테트라셀미스 속 변이체의 배양물을 포함하는 바이오에너지 조성물
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