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골 형성 단백질 4(Bone morphogenetic protein 4, BMP4) 및 소닉 헤지호그(Sonic Hedgehog; SHH)의 존재 하에서 장 신경계(enteric nervous system; ENS) 세포를 계대 배양하여, 상기 장 신경계의 성숙을 유도하는 단계를 포함하는, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 장 신경계(ENS) 세포는 신경능선 세포(neural crest cell)와 후장(hind gut) 세포를 공배양(co-culture)하여 분화 유도된 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제4항에 있어서,상기 공배양은 골 형성 단백질(BMP) 및 성장 인자(growth factor) 중 적어도 하나의 존재 하에서 수행되는, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제5항에 있어서,상기 성장 인자는 bFGF(basic fibroblast growth factor) 및 EGF(epidermal growth factor) 중 적어도 하나인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제4항에 있어서,상기 공배양은 3차원 배양 방법에 의해 수행되는, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제4항에 있어서,상기 공배양 기간은 2 일 내지 14 일 동안 수행되는 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제4항에 있어서, 상기 신경능선 세포는 외배엽성 세포(ectoderm cell)를 액티빈(activin) 억제제 및 Wnt 신호 활성자(Wnt signaling activator) 중 적어도 하나의 존재 하에서 배양하여 분화 유도된 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제9항에 있어서, 상기 액티빈 억제제는 SB431542, 폴리스타틴(Follistatin), A8301, DMH1, K02288 및 SB505124로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제9항에 있어서, 상기 Wnt 신호 활성자는 CHIR99021, BIO((2'Z,3'E)-6-Bromoindirubin-3'-oxime), BIO-아세톡심((2'Z,3'E)-6-Bromoindirubin-3'-acetoxime), 3F8(5-Ethyl-7,8-dimethoxy-H-pyrrolo[3,-4-c]isoquinoline-1,3(2H)-dione), A070722(1-(7-Methoxyquinoiin-4-yl)-3-[6-(tr-ifluoromethyl)pyridin-2-yl]urea), AR-A014418(N-[(4-Methoxyphenyl)methyl]-N'-(5-ni-tro-2-thiazolyl)urea), SB216763(3-(2,4-Dichlorophenyl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione), SB415286(3-[(3-Chloro-4-hydroxyphenyl)amino]-4-(2-nitrophenyl)-1H-pyrrole-2,5-dione), TC-G24(N-(3-Chioro-4-methylphenyl)-5-(4-ni-trophenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-amine), TCS2002(2-ethyl-5-[3-[4-(methylsulfinyi)ph-enyl]-5-benzofuranyi]-1,3,4-oxadiazole) 및 TWS119(3-[[6-(3-Aminophenyl)-7H-pyrrolo[2,-3-d]pyrimidin-4-yl]oxyphenol ditrifluoroacetate)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제9항에 있어서, 상기 외배엽성 세포의 배양 기간은 12 시간 내지 6 일인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제9항에 있어서, 상기 외배엽성 세포는 줄기세포를 골 형성 단백질(Bone morphogenetic protein, BMP) 억제제, 액티빈(activin) 억제제 및 Wnt 신호 활성자(Wnt signaling activator) 중 적어도 하나의 존재 하에서 배양하여 분화 유도된 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제13항에 있어서, 상기 줄기세포는 인간 배아 줄기세포(hESC)인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제13항에 있어서, 상기 골 형성 단백질 억제제는 LDN-193189(4-(6-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)quinoline), 도르소몰핀(Dorsomorphin; 6-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)phenyl]-3-pyridin-4-yl-pyrazolo[1,5-a]pyrimidine) 및 노긴(Noggin)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제4항에 있어서,상기 후장 세포는 내배엽성 세포(endoderm cell)를 섬유모세포 성장인자 4(fibroblast growth factor 4; FGF4) 및 Wnt 신호 활성자(Wnt signaling activator) 중 적어도 하나의 존재 하에서 배양하여 분화 유도된 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제16항에 있어서,상기 내배엽성 세포의 배양 기간은 1 일 내지 10 일인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제16항에 있어서,상기 내배엽성 세포는 줄기세포를 TGF-β 패밀리 단백질 및 Wnt 신호 활성자(Wnt signaling activator) 중 적어도 하나의 존재 하에서 배양하여 분화 유도된 것인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제18항에 있어서,상기 TGF-β 패밀리 단백질은 TGF-β, 액티빈(activin), 골 형성 단백질(BMP) 및 성장 분화 인자(Growth and Differentiation Factor; GDF)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제18항에 있어서,상기 줄기세포의 배양 기간은 12 시간 내지 7 일인, 장관 오가노이드의 제조 방법
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제1항 및 제4항 내지 제20항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 장관 오가노이드
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제21항의 장관 오가노이드를 포함하는 조직 치료제
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제21항의 장관 오가노이드를 이용하여 장 관련 질환 치료제를 스크리닝하는 방법
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제23항에 있어서, 상기 방법은 상기 장관 오가노이드에 피검 물질을 처리하는 단계; 및 상기 피검 물질의 처리 후 장 관련 질환의 바이오마커 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현이 처리 전과 비교하여 증가 또는 감소되는 경우, 상기 피검 물질을 장 관련 질환의 치료제로 선별하는 단계를 포함하는, 스크리닝하는 방법
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제23항에 있어서, 상기 장 관련 질환은 염증성 장 질환(IBD), 과민성 대장 증후군(IBS), 크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염(UC), 단장 증후군(short bowel syndrome), 장염 (enterocolitis), 유전적 장질환인 히르슈슈프룽 병 (hirschsprung's disease) 및 셀리악 병(Celiac disease)으로부터 선택되는 것인, 스크리닝하는 방법
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