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리프로그래밍 인자(Reprogramming Factor) 및 CAR(Chimeric Antigen Receptor) 유전자가 도입된 분리된 세포를 a) 성장인자, 사이토카인 및 GSK3β(Glycogen Synthase Kinase 3 beta) 저해제(Inhibitor)를 포함하는 제 1 배지; b) 성장인자, 사이토카인 및 AHR(Aryl Hydrocarbon Receptor) 길항제(Antagonist)를 포함하는 제 2 배지; 및 c) 사이토카인, GSK3β 저해제 및 AHR 길항제를 포함하는 제 3 배지;에서 순차적으로 배양하여 NK 세포로 직접 리프로그래밍 시키는 단계를 포함하는, CAR-iNK(induced Natural Killer) 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 CAR 유전자는 상기 리프로그래밍 인자 도입시, 상기 a)의 제 1 배지에서 배양시, 상기 b)의 제 2 배지에서 배양시 또는 상기 c)의 제 3 배지에서 배양시 중 선택되는 어느 하나의 시점에서 상기 분리된 세포에 도입되는 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 성장인자는 SCF(Stem Cell Factor), FLT3(FMS-like Tyrosine Kinase) 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL(Interleukin)-3, IL-6 IL-15, IL-7, IL-2, IL-21, IL-12, IL-18 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 a)의 제 1 배지는 SCF, FLT3, IL-3 및 IL-6 및 CHIR99021을 포함하는 배지인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 b)의 제 2 배지는 SCF, FLT3, IL-15, IL-7, IL-2 및 스템레게닌 I을 포함하는 배지인 CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 c)의 제 3 배지는 IL-2, IL-15, IL-21, IL-12, IL-18, CHIR99021 및 스템레게닌 I을 포함하는 배지인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 a)의 제 1 배지, b)의 제 2 배지 또는 c)의 제 3 배지는 FBS(Fetal Bovine Serum), 항생제 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 리프로그래밍 인자 및 CAR 유전자가 도입된 분리된 세포는 상기 a)의 제 1 배지에서 4 내지 7 일 동안 배양하고, 상기 b)의 제 2 배지에서 10 내지 14 일 동안 배양한 후, c)의 제 3 배지에서 14 일 이상 배양하는 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 리프로그래밍 인자는 Lin28, Asc11, Pitx3, Nurr1, Lmx1a, Nanog, Oct4, Oct3, Sox2, Klf4, Myc 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제10항에 있어서, 상기 리프로그래밍 인자는 Oct4, Sox2, Klf4 및 Myc인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 CAR 유전자는 i) CD8 리더(Leader), CD19 scFv, CD8 힌지(hinge), CD8 막 관통 도메인 및 Fc-γ 수용체를 포함하는 CAR 유전자;ii) CD8 리더, CD19 scFv, CD8 힌지, CD8 막 관통 도메인, CD28 세포내 도메인, CD3ζ 및 IRES(Internal Ribosome Entry Site)를 포함하는 CAR 유전자;iii) CD8 리더, MSLN(Mesothelin) scFv, CD8 힌지, CD8 막 관통 도메인, CD28 세포내 도메인, CD3ζ 및 IRES를 포함하는 CAR 유전자; 및iV) CD8 리더, HER2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2) scFv, CD8 힌지, CD8 막 관통 도메인, CD28 세포내 도메인, CD3ζ 및 IRES를 포함하는 CAR 유전자;로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제12항에 있어서, 상기 CAR 유전자는 GFP(Green Fluorescent Protein)를 추가로 포함하는 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 리프로그래밍 인자 및 CAR 유전자가 도입되는 분리된 세포는 NK 세포를 제외한 체세포인 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 제조된 CAR-iNK 세포는 CD56+, CD16+, CD3- 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 발현하는 것인, CAR-iNK 세포 제조방법
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 CAR-iNK 세포
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 CAR-iNK 세포를 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 CAR-iNK 세포를 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 약학 조성물
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제18항에 있어서, 상기 암은 CD19, MSLN 또는 HER2으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현과 연관된 암인, 암 치료용 약학 조성물
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제19항에 있어서, 상기 CD19, MSLN 또는 HER2으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현과 연관된 암은 골수이형성증, 골수이형성 증후군
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제20항에 있어서, 상기 CD19, MSLN 또는 HER2으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현과 연관된 암은 혈액암, 췌장암, 전립선암, 대장암, 폐암, 간암, 위암, 흑색종 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 암 치료용 약학 조성물
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