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세포 배양 용기의 바닥에 비접촉적으로 배치되어 있고 미세관통막들 간에는 일정한 간격을 유지하고 있는 다수의 미세관통막; 및상기 다수의 미세관통막을 채우고 있는 수화젤층을 포함하는,단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이
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제1항에 있어서,상기 미세관통막은 가로 × 세로가 1 μm × 1 μm ∼ 500 μm × 500 μm 이고, 두께는 10 μm ∼ 500 μm의 크기를 가지며, 상기 간격은 1 μm ~ 500 μm인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이
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제1항에 있어서,미세관통막 사이에 형성되는 공간은 가로 × 세로가 1 μm × 1 μm ∼ 500 μm × 500 μm인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이
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제1항에 있어서,상기 미세관통막은 기판의 주요성분이 유리, 실리콘, 나일론(nylon), 폴리에스터(polyester) 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리에틸렌(polyethylene), 폴리(이)미드(poly(i)mide), 액정크리스탈폴리머 (liquid crystal polymer), 폴리에틸렌 테레프탈레이트(polyethylene terephthalate), 메실메타아크릴레이트(methyl methacrylate), 폴리메틸메타아크릴레이트(polymethyl methacrylate), 폴리카보네이트(polycarbonate), 폴리테트라플루오로에텔렌(polytetrafluoroethylene) 또는 폴리다이메틸실록레인(polydimethylsiloxane)이거나; 상기 물질로 코팅된 기판으로 그 구조가 그물망형 또는 규칙성 관통형 다공성막;인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이
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제1항에 있어서,상기 수화젤은 세포외기질(ECM-matrigelTM 포함), 콜라겐(collagen), 젤라틴(gelatin), 키토산(chitosan), 라미닌(laminin), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 피브린 (fibrin), 피프로넥틴(fibronectin), 폴리락티드 계열 폴리머 스캐폴드(PLA/PDLA/PLLA polymer scaffold), 폴리스티렌 폴리머 스캐폴드(polystylene polymer scaffold), 히알루론산(hyaluronic acid), 다공성 실크(porous silk) 및 펩타이드 하이드로겔(peptide hydrogel(PuraMatrixTM포함))로 이루어진 매트릭스 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이
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(1) 산소 플라즈마를 처리하여 미세관통막을 준비하는 단계;(2) 산소 플라즈마가 처리된 기판 상에 수화젤을 도포하는 단계;(3) 상기 미세관통막 상에 상기 수화젤을 부착시키되, 최상단은 기판이 오도록 하고 수화젤이 미세관통막과 부착되도록 하는 단계;(4) 상기 수화젤이 미세관통막 안으로 삽입하는 단계;(5) 상기 최상단에 위치하고 있는 기판이 최하단이 되도록 상기 미세관통막을 뒤집는 단계; 및(6) 상기 최하단에 위치하고 있는 기판의 무게와 상기 기판 및 수화젤의 인력의 차이로 인해 미세관통막의 수화젤 표면이 오목한 형태가 되도록 젤화시키는 단계를 포함하는,단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서, 상기 산소 플라즈마는 대기압 하의 진공상태에서 산소 농도 5% ~ 100%, 산소의 유류양 0 ~ 500 sccm, 플라즈마의 파워 10 ~ 1000 W 및 1초 ~ 1시간의 작동시간으로 수행하는 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서,상기 미세관통막은 가로 × 세로가 1 μm × 1 μm ∼ 500 μm × 500 μm 이고, 두께는 10 μm ∼ 500 μm의 크기를 가지며, 상기 미세관통막 간의 간격은 1 μm ~ 500 μm이고, 상기 미세관통막 사이에 형성되는 공간은 가로 × 세로가 1 μm × 1 μm ∼ 500 μm × 500 μm인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서,상기 미세관통막은 기판의 주요성분이 유리, 실리콘, 나일론(nylon), 폴리에스터(polyester) 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리에틸렌(polyethylene), 폴리(이)미드(poly(i)mide), 액정크리스탈폴리머 (liquid crystal polymer), 폴리에틸렌 테레프탈레이트(polyethylene terephthalate), 메실메타아크릴레이트(methyl methacrylate), 폴리메틸메타아크릴레이트(polymethyl methacrylate), 폴리카보네이트(polycarbonate), 폴리테트라플루오로에텔렌(polytetrafluoroethylene) 또는 폴리다이메틸실록레인(polydimethylsiloxane)이거나; 상기 물질로 코팅된 기판으로 그 구조가 그물망형 또는 규칙성 관통형 다공성막;인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서,상기 수화젤은 세포외기질(ECM-matrigelTM 포함), 콜라겐(collagen), 젤라틴(gelatin), 키토산(chitosan), 라미닌(laminin), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 피브린 (fibrin), 피프로넥틴(fibronectin), 폴리락티드 계열 폴리머 스캐폴드(PLA/PDLA/PLLA polymer scaffold), 폴리스티렌 폴리머 스캐폴드(polystylene polymer scaffold), 히알루론산(hyaluronic acid), 다공성 실크(porous silk) 및 펩타이드 하이드로겔(peptide hydrogel(PuraMatrixTM포함))로 이루어진 매트릭스 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서,상기 (6) 단계에서 젤화는 중력이외에 원심력, 모세관 힘, 흡인에 의한 힘 또는 유체압력에 의해 기판이 받는 힘과 표면 장력에 의해 미세관통막의 수화젤 표면이 오목한 형태가 되도록 젤화시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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제6항에 있어서,상기 수화젤을 젤화시키는 온도는 10 ∼ 42°C인 것을 특징으로 하는, 단일 세포의 분리 및 배양을 위한 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이 제조방법
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(1) 세포 현탁액과 수화젤을 혼합하여 세포 및 수화젤의 혼합물을 제조하는 단계;(2) 상기 세포 및 수화젤의 혼합물을 제1항의 수화젤 마이크로웰 어레이 상에 분주하고 젤화를 유도하는 단계; 및(3) 상기 세포가 상기 수화젤 마이크로웰 어레이의 미세관통막 간의 사이로 1개씩 단일 세포로 분리되어 위치하는 단계를 포함하는,미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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제13항에 있어서,상기 세포 현탁액에는 세포가 1 × 104 ~ 1 × 106 개/mL의 세포수로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는, 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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제13항에 있어서,상기 (3) 단계에서 단일 세포로의 분리는 중력, 원심력, 모세관 힘, 흡인에 의한 힘 또는 유체압력에 의해 상기 세포가 미세관통막 간의 세포 포획 공간으로 단일세포 형태로 위치되어 분리되는 것을 특징으로 하는, 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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제13항에 있어서,상기 분리는, 중력에 의한 방법은 10분 ~ 1 시간 동안 수행되고, 원심력에 의한 분리는 50 ~ 500g에 의해 수행되며, 유체압력이나 흡인에 의한 힘, 또는 모세관 힘 (capillary foce)은 30 초 ~ 60분 동안 수행되어, 세포가 미세관통막 간의 세포 포획 공간으로 단일세포 형태로 위치되어 분리되는 것을 특징으로 하는, 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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제13항에 있어서,상기 분리는 단일세포에 특이적으로 결합하거나 반응할 수 있는 비드(bead)도 포함하는 것을 특징으로 하는, 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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제13항에 있어서,상기 (3) 단계의 단일 세포로의 분리 위치 이후, 세포와 함께 수화젤을 젤화시키는 단계를 더 포함하며, 이때 상기 젤화는 10 ∼ 42°C의 온도 및 5 ~ 10%의 이산화탄소 농도 조건에서 수행하는 것을 특징으로 하는, 미세관통 기반의 수화젤 마이크로웰 어레이를 이용한 단일세포의 분리 및 배양 방법
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(1) 세포 현탁액과 수화젤을 혼합하여 세포 및 수화젤의 혼합물을 제조하는 단계;(2) 상기 세포 및 수화젤의 혼합물을 미세관통막에 분주하는 단계; 및(3) 상기 세포가 중력, 원심력, 모세관 힘, 흡인에 의한 힘 또는 유체압력에 의해 상기 미세관통막 간의 사이로 1개씩 단일 세포로 분리되어 위치하는 단계를 포함하는,미세관통 기반의 단일세포 분리 및 배양 방법
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세포 배양 용기;상기 세포 배양 용기의 바닥에 비접촉적으로 배치되어 있고 미세관통막 간에는 일정한 간격을 유지하면서 배열되어 있는 다수의 미세관통막; 및상기 미세관통막을 채우고 있는 수화젤 층을 포함하는,단일 세포 분리 및 배양 장치
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