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(a) 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리글루타메이트 서열을 TAT-Cre를 코딩하는 유전자에 삽입하여 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자를 얻는 단계;(b) 단계(a)에서 얻어진 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자를 발현시켜 폴리글루타메이트-TAT-Cre 재조합 단백질을 얻는 단계; 및(c) 단계(b)에서 얻어진 폴리글루타메이트-TAT-Cre 재조합 단백질을 정제하는 단계를 포함하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 단계(a)의 상기 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자가 His 태그 및 GST 태그 중 어느 하나를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 단계(a)의 상기 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자가 TEV 프로테아제 인식 부위를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 단계(a)의 상기 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자가 TAT 펩타이드 N-말단에 글리신(glycine, G), 메티오닌(methionine, M) 및 알라닌(alanine, A)으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산 잔기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 단계(b)에서 상기 발현이 IPTG 0
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제5항에 있어서, 상기 IPTG가 숙주세포에서 1 내지 5시간 동안 유도되는 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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7
제1항에 있어서, 단계(b)에서 상기 발현이 대장균을 숙주세포로 하여 수행되는 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질의 제조방법
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8
(a) 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리글루타메이트 서열을 TAT-Cre를 코딩하는 유전자에 삽입하여 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자를 얻는 단계;(b) 단계(a)에서 얻어진 폴리글루타메이트-TAT-Cre 유전자를 발현시켜 폴리글루타메이트-TAT-Cre 재조합 단백질을 얻는 단계;(c) 단계(b)에서 얻어진 폴리글루타메이트-TAT-Cre 재조합 단백질을 정제하는 단계;(d) 단계(c)에서 얻어진 폴리글루타메이트-TAT-Cre 재조합 단백질을 TEV 프로테아제와 반응시켜 생성물을 얻는 단계; 및(e) 단계(d)에서 얻어진 생성물을 정제하여 TAT-Cre 단백질을 얻는 단계를 포함하는 TAT-Cre 단백질의 제조방법
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제8항에 있어서, 단계(d)에서 상기 반응이 25 내지 35 ℃에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 TAT-Cre 단백질의 제조방법
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제8항에 있어서, 단계(d)에서 상기 반응이 pH 7
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제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 의해 제조된 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질
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제11항에 있어서, 상기 단백질이 46 kDa인 것을 특징으로 하는 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질
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제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의해 제조된 TAT-Cre 단백질
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제13항에 있어서, 상기 단백질이 42 kDa인 것을 특징으로 하는 TAT-Cre 단백질
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제11항의 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질; 및 상기 융합 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 카르고를 포함하고, 상기 카르고가 단백질, 핵산, 펩타이드, 지질, 당지질, 미네랄, 당, 조영물질, 약물 및 화학물질로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 카르고 전달 시스템
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제11항의 폴리글루타메이트-TAT-Cre 융합 단백질을 포함하는 세포 투과용 약학적 조성물
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제13항의 TAT-Cre 단백질; 및 상기 융합 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 카르고를 포함하고, 상기 카르고가 단백질, 핵산, 펩타이드펩타이드, 당지질, 미네랄, 당, 조영물질, 약물 및 화학물질로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 카르고 전달 시스템
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제13항의 TAT-Cre 단백질을 포함하는 세포 투과용 약학적 조성물
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