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한국형 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염에 감수성을 가지는 인간 DPP4 유전자를 전신에 발현하는 형질전환마우스와 이의 용도

  • 기술번호 : KST2021000495
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염 수용체인 인간 Dipeptidyl peptidase 4 (human DPP4, hDPP4) 유전자를 전신에 발현하는 형질전환마우스에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 CMV 프로모터; 인간 DPP4 유전자; 및 C 말단 부위에 Flag 펩타이드를 tag시켜 작동가능하게 연결된 인간 DPP4 유전자를 발현하기 위한 재조합 벡터로 형질전환된, 인간 DPP4 유전자를 발현하기 위한 형질전환 마우스, 상기 형질전환마우스를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 상기 형질전환마우스는 전신에 hDPP4 유전자 발현을 확인하였고, 한국형 및 유럽형 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 특이적 감수성을 확인하였다. 중동호흡기증후군 코로나바이러스가 감염된 hDPP4 형질전환마우스는 감염 말기에 모두 급격한 체중 저하와 더불어 치사가 일어났고, 심각한 폐 손상이 관찰되었다. 또한, 중동호흡기증후군 코로나바이러스가 감염된 hDPP4 형질전환마우스에서 다양한 염증성 사이토카인 분비가 급격히 일어남을 확인하였다. 본 발명에 따른 hDPP4 전신 발현 형질전환마우스는 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염성 질병 발달을 규명하기 위한 in vivo 연구에 중요한 동물모델로 활용 가능하며, 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제어하기 위한 백신 및 치료제 개발에 매우 유용하게 활용 가능하다.
Int. CL A01K 67/027 (2006.01.01) C12N 15/85 (2006.01.01)
CPC A01K 67/0275(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 2015/8581(2013.01) A01K 2267/0337(2013.01)
출원번호/일자 1020200024827 (2020.02.28)
출원인 대한민국(질병관리청장), 한국화학연구원, 주식회사 마크로젠
등록번호/일자 10-2207249-0000 (2021.01.19)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20210125) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2020.02.28)
심사청구항수 3

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(질병관리청장) 대한민국 충청북도 청원군
2 한국화학연구원 대한민국 대전광역시 유성구
3 주식회사 마크로젠 대한민국 서울특별시 금천구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이주연 충청북도 청주시 흥덕구
2 김성순 충청북도 청주시 흥덕구
3 양정선 충청북도 청주시 흥덕구
4 최장훈 충청북도 청주시 흥덕구
5 이태영 충청북도 청주시 흥덕구
6 박우정 충청북도 청주시 흥덕구
7 김성준 대전광역시 유성구
8 구근본 대전광역시 유성구
9 김범태 대전광역시 유성구
10 안대균 대전광역시 유성구
11 김홍석 서울특별시 강서구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인주원 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, *층(논현동, 건설회관)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(관리청: 특허청장, 승계청: 질병관리청장)
2 한국화학연구원 대전광역시 유성구
3 주식회사 마크로젠 서울특별시 금천구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2020.02.28 수리 (Accepted) 1-1-2020-0212284-94
2 [우선심사신청]심사청구서·우선심사신청서
2020.11.16 수리 (Accepted) 1-1-2020-1226209-86
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.11.16 수리 (Accepted) 4-1-2020-5258616-02
4 예비심사결과통지서
2020.12.10 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0867904-24
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.12.21 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-1390990-63
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.12.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-1398356-12
7 면담 결과 기록서
2020.12.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2020-0201619-53
8 등록결정서
Decision to grant
2021.01.04 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2021-0006400-54
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번호 청구항
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(1) 서열번호 1인 인간 DPP4 유전자를 확보하는 단계; (2) CMV 프로모터에 의해 인간 DPP4 유전자가 발현되는 pCMV-hDPP4-2XFlag 재조합 벡터를 제조하는 단계;(3) 상기 재조합 벡터의 서열 및 발현을 형질 도입된 인간 배아 신장 293T 세포의 파쇄용액과 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법을 이용하여 확인하는 단계;(4) 상기 재조합 벡터를 SpeI과 XmnI 제한효소로 공동 처리 하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 준비하는 단계;(5) 미세주입법(microinjection)을 통하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 C57BL/6 마우스에 삽입시키는 단계;(6) 꼬리 절단(tail-cut) 방법으로 DNA를 확보하여 생산된 마우스를 확인하는 단계; (7) 뇌, 간 및 폐로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 분리하여 항-hDPP4 항체 또는 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법으로 유전자 발현을 확인하는 단계; 및(8) Huh7 세포주에서 증식한 한국형 및 유럽형으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 비강 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경로를 통해 감염시켜 체중, 치사율, 감염경로 및 염증성 사이토카인 분비량을 확인하는 단계; 를 포함하는 인간 DPP4 유전자를 발현하는 형질전환 마우스를 이용하여 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 검출 정보 제공 방법
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(1) 서열번호 1인 인간 DPP4 유전자를 확보하는 단계; (2) CMV 프로모터에 의해 인간 DPP4 유전자가 발현되는 pCMV-hDPP4-2XFlag 재조합 벡터를 제조하는 단계;(3) 상기 재조합 벡터의 서열 및 발현을 형질 도입된 인간 배아 신장 293T 세포의 파쇄용액과 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법을 이용하여 확인하는 단계;(4) 상기 재조합 벡터를 SpeI과 XmnI 제한효소로 공동 처리 하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 준비하는 단계;(5) 미세주입법(microinjection)을 통하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 C57BL/6 마우스에 삽입시키는 단계;(6) 꼬리 절단(tail-cut) 방법으로 DNA를 확보하여 생산된 마우스를 확인하는 단계; (7) 뇌, 간 및 폐로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 분리하여 항-hDPP4 항체 또는 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법으로 유전자 발현을 확인하는 단계; (8) Huh7 세포주에서 증식한 한국형 및 유럽형으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 비강 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경로를 통해 감염시켜 체중, 치사율, 감염경로 및 염증성 사이토카인 분비량을 확인하는 단계; (9) 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 백신 후보물질을 사전 투여하는 단계; 및 (10) 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 백신 후보물질의 효과를 확인하는 단계;를 포함하는 인간 DPP4 유전자를 발현하는 형질전환 마우스를 이용하여 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 백신 스크리닝 방법
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(1) 서열번호 1인 인간 DPP4 유전자를 확보하는 단계; (2) CMV 프로모터에 의해 인간 DPP4 유전자가 발현되는 pCMV-hDPP4-2XFlag 재조합 벡터를 제조하는 단계;(3) 상기 재조합 벡터의 서열 및 발현을 형질 도입된 인간 배아 신장 293T 세포의 파쇄용액과 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법을 이용하여 확인하는 단계;(4) 상기 재조합 벡터를 SpeI과 XmnI 제한효소로 공동 처리 하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 준비하는 단계;(5) 미세주입법(microinjection)을 통하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 C57BL/6 마우스에 삽입시키는 단계;(6) 꼬리 절단(tail-cut) 방법으로 DNA를 확보하여 생산된 마우스를 확인하는 단계; (7) 뇌, 간 및 폐로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 분리하여 항-hDPP4 항체 또는 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법으로 유전자 발현을 확인하는 단계; (8) Huh7 세포주에서 증식한 한국형 및 유럽형으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 비강 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경로를 통해 감염시켜 체중, 치사율, 감염경로 및 염증성 사이토카인 분비량을 확인하는 단계; (9) 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 치료제 후보물질을 투여하는 단계; 및 (10) 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 치료제 후보물질의 효과를 확인하는 단계;를 포함하는 인간 DPP4 유전자를 발현하는 형질전환 마우스를 이용하여 중동호흡기증후군 코로나바이러스 치료제 스크리닝 방법
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 보건복지부 한국화학연구원 감염병관리기술개발연구 메르스바이러스 수용체 발현 형질전환 마우스 개발
2 보건복지부 질병관리본부 감염병관리기술개발연구 메르스바이러스의 변이 예측 및 약독화주 개발