1 |
1
다음 단계를 포함하는 유도 도파민성 신경세포 전구체(induced dopaminergic neuronal progenitors, iDPs)의 제조방법:a) 성체세포에 Oct4, Sox2, Klf4 및 Myc로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 도입하는 단계;b) 상기 세포를 EGF 및 FGF2를 포함하는 배지에서 배양하는 단계; 및c) 상기 세포를 FGF8, SHH, Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 포함하는 배지에서 배양하는 단계
|
2 |
2
제1항에 있어서,상기 성체세포는 섬유아세포, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC) 또는 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell, MSC)인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
3 |
3
제1항에 있어서,상기 성체세포는 인간 유래인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
4 |
4
제1항에 있어서, 상기 Wnt 신호전달 작용제는i) Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a, Wnt9b, Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 및 Wnt16b; ii) GSK3 억제제인 리튬, LiCl, 이가 아연, BIO, SB216763, SB415286, CHIR99021, CHIR98014, QS11 수화물, TWS119, 켄폴론, 알스터폴론, 인디루빈-3-옥심, TDZD-8 및 Ro 31-8220 메탄설폰산염; iii) Axin 억제제;iv) APC 억제제;v) 노린; vi) R-스폰딘 2; 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
5 |
5
제1항에 있어서, 상기 TGF-β 억제제는 A83-01, SB431542, RepSox, LY364947, SB525334 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
6 |
6
제1항에 있어서,상기 b)단계 배양 후, ROCK(Rho-associated protein kinase) 억제제인 Y-27632를 첨가하여 배양하는 단계를 더 포함하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
7 |
7
제1항에 있어서,상기 b)단계의 배지는 Wnt 신호전달 작용제, TGF-β 억제제, 2-포스포-L-아스코르브산 및 부티르산 나르튬(Sodium butyrate; NaB)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 추가적으로 포함하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
8 |
8
제1항에 있어서,상기 b)단계의 배지는 Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 추가로 포함하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
9 |
9
제1항에 있어서,상기 c)단계의 배지는 2-포스포-L-아스코르브산를 추가적으로 포함하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
10 |
10
제1항에 있어서,상기 b)단계의 배지는 1 ng/㎖ 내지 100 ng/㎖의 EGF 및 1 ng/㎖ 내지 100 ng/㎖의 FGF2를 포함하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
11 |
11
제1항에 있어서,상기 c)단계의 배지는 10 ng/㎖ 내지 1000 ng/㎖의 FGF8, 100 ng/㎖ 내지 2000 ng/㎖의 SHH, 0
|
12 |
12
제1항에 있어서, 상기 a)단계는 12시간 내지 36시간 동안 수행하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
13 |
13
제1항에 있어서, 상기 b)단계는 5일 내지 9일 동안 수행하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
14 |
14
제1항에 있어서, 상기 c)단계는 10일 내지 18일 동안 수행하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
15 |
15
제1항에 있어서,성체세포로부터 유도 도파민성 신경세포 전구체를 직접 리프로그래밍 하는 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체의 제조방법
|
16 |
16
제1항의 제조방법으로 제조된 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
17 |
17
제16항에 있어서,상기 유도 도파민성 신경세포 전구체는 증식 가능한 것인, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
18 |
18
(i) CORIN, FOXA2 및 LMX1A로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자가 만능 줄기세포 유래 도파민성 신경세포 전구체와 비교하여 감소된 발현을 나타내거나,(ii) EN1, PAX2, PAX5, PAX8 및 SPRY1로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자가 만능 줄기세포 유래 도파민성 신경세포 전구체와 비교하여 증가된 발현을 나타내거나, 또는 (iii) 상기 (i)의 감소된 발현 및 상기 (ii)의 증가된 발현을 나타내는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
19 |
19
제18항에 있어서, (i) CORIN, FOXA2 및 LMX1A로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자가 만능 줄기세포 유래 도파민성 신경세포 전구체와 비교하여 1,000배 내지 100,000배 감소된 발현을 나타내는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
20 |
20
제18항에 있어서, (ii) EN1, PAX2, PAX5, PAX8 및 SPRY1로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자가 만능 줄기세포 유래 도파민성 신경세포 전구체와 비교하여 3배 내지 300배 증가된 발현을 나타내는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
21 |
21
제18항에 있어서,HOXB1을 발현하지 않는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
22 |
22
제18항에 있어서,내인성 Oct4 및 NANOG는 유도 만능 줄기세포와 비교하여 감소된 발현을 나타내는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
23 |
23
제18항에 있어서,PAX6은 유도 신경 줄기세포와 비교하여 감소된 발현을 나타내며,EN1, LMX1A 및 FOXA2은 유도 신경 줄기세포와 비교하여 증가된 발현을 나타내는, 유도 도파민성 신경세포 전구체
|
24 |
24
제16항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 기재된 유도 도파민성 신경세포 전구체를 유효성분으로 포함하는 파킨슨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물
|
25 |
25
제16항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 기재된 유도 도파민성 신경세포 전구체에 파킨슨병 예방 또는 치료제 후보 물질을 처리하는 단계; 및후보 물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 상기 유도 도파민성 신경세포 전구체의 증식력, 활성 또는 도파민성 신경세포로의 분화능을 측정하는 단계를 포함하는 파킨슨병 예방 또는 치료제 스크리닝 방법
|
26 |
26
Oct4, Sox2, Klf4 및 Myc로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자가 도입된 인간 성체세포, EGF, FGF2, Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 포함하는 유도 도파민성 신경세포 전구체 제조용 혼합물
|
27 |
27
유도 도파민성 신경세포 전구체, FGF8, SHH, Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 포함하는 혼합물
|
28 |
28
EGF, FGF2, Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 포함하는 유도 도파민성 전구체 제조용 배지 조성물
|
29 |
29
FGF8, SHH, Wnt 신호전달 작용제 및 TGF-β 억제제를 포함하는 유도 도파민성 전구체 제조 또는 유지용 배지 조성물
|
30 |
30
제16항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 기재된 유도 도파민성 신경세포 전구체를 신경세포 분화 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 도파민성 신경세포의 제조방법
|