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서열번호 2 내지 5 중 하나의 시퀀스로 구성되고, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터 제조에 사용되는 것인, 폴리시스트론 발현 벡터 제조용 백본 벡터
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바이너리 벡터 (binary vector)에 제2 제한효소 인식 부위를 삽입시킨 것을 백본 벡터로 사용하고,상기 백본 벡터의 제2 제한효소에 의한 절단 부위에 2개의 오버행 시퀀스가 위치하고, 상기 2개의 오버행 시퀀스는 각각 정방향 가닥과 역방향 가닥에 위치하고,상기 제2 제한효소에 의한 절단 부위에 하기 (1) 프로모터; (2) 1 이상의 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스; (3) 2 이상의 목적 유전자 모듈; 및 (4) 터미네이터 요소들이 삽입된 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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제 2항에 있어서,상기 프로모터에서 2개의 오버행 시퀀스는, 각각 백본 벡터의 역방향 가닥에 위치한 오버행 시퀀스 및 제1 목적 유전자 모듈의 정방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적이고,상기 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스에서 2개의 오버행 시퀀스는, 각각 제1 목적 유전자 모듈의 역방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스 및 제2 목적 유전자 모듈의 정방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적이고,상기 목적 유전자 모듈에서 2개의 오버행 시퀀스는, i) 각각 프로모터의 역방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스 및 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스의 정방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적이거나, ii) 각각 제1 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스의 역방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스 및 제2 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스의 정방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적이거나, iii) 각각 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스의 역방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스 및 터미네이터의 정방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적이고,상기 터미네이터에서 2개의 오버행 시퀀스는, 각각 백본 벡터의 정방향 가닥에 위치한 오버행 시퀀스 및 목적 유전자 모듈의 역방향 5' 말단에 위치한 오버행 시퀀스와 상보적인 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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제 2항에 있어서,상기 바이너리 벡터는 pLSLR 벡터인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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5
제 4항에 있어서,상기 백본 벡터는 서열번호 2 내지 5 중 하나의 시퀀스를 갖는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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6
제 2항에 있어서,상기 제2 제한효소는 BasI인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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7
제 6항에 있어서,상기 모든 오버행 시퀀스는 4개의 염기를 포함하는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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8
제 6항에 있어서,상기 백본 벡터에 위치한 2개의 오버행 시퀀스는 역방향 가닥에 5'-ATAG-3' 및 정방향 가닥에 5'-TAAG-3'인 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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제 6항에 있어서,상기 폴리시스트론 발현용 벡터에 삽입된 요소들은, 프로모터 - 제1 목적 유전자 모듈 - 제1 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스 - 제2 목적 유전자 모듈 - 제2 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스 - 제3 목적 유전자 모듈 - 터미네이터 순서로 삽입된 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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10
제 9항에 있어서,상기 프로모터는 정방향의 5' 말단에 5'-CTAT-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-GGTT-3' 오버행 시퀀스를 포함하고, 상기 제1 목적 유전자 모듈은 정방향의 5' 말단에 5'-AACC-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-CCTC-3' 오버행 시퀀스를 포함하고, 상기 제1 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스는 정방향의 5' 말단에 5'-GAGG-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-AGGG-3' 오버행 시퀀스를 포함하고, 상기 제2 목적 유전자 모듈은 정방향의 5' 말단에 5'-CCCT-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-TAGC-3' 오버행 시퀀스를 포함하고, 상기 제2 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스는 정방향의 5' 말단에 5'-GCTA-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-GGGT-3' 오버행 시퀀스를 포함하고, 상기 제3 목적 유전자 모듈은 정방향의 5' 말단에 5'-ACCC-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-ATAT-3' 오버행 시퀀스를 포함하고,상기 터미네이터는 정방향의 5' 말단에 5'-ATAT-3' 및 역방향의 5' 말단에 5'-CTTA-3' 오버행 시퀀스를 포함하는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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11
제 6항에 있어서,상기 제1 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스 및 제2 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스는, 오버행 시퀀스를 제외하고 각각 서열번호 22 및 23의 시퀀스를 갖는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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제 6항에 있어서,상기 프로모터와 터미네이터는, 오버행 시퀀스를 제외하고 각각 서열번호 24 및 25의 시퀀스를 갖는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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서열번호 2 내지 5 중 하나를 갖는 백본 벡터;서열번호 6의 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터;서열번호 7의 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터;서열번호 8의 프로모터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터;서열번호 9의 터미네이터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터; 제1 목적 유전자 모듈;제2 목적 유전자 모듈; 및제3 목적 유전자 모듈로부터 제조되고,상기 제1 목적 유전자 모듈은, 서열번호 10 및 11의 시퀀스, 상기 서열번호 10 및 11의 시퀀스 각각의 3' 말단에 연결된 제1 목적 유전자 특이적 시퀀스, 및 제1 목적 유전자를 포함하고,상기 제2 목적 유전자 모듈은, 서열번호 12 및 13의 시퀀스, 상기 서열번호 12 및 13의 시퀀스 각각의 3' 말단에 연결된 제2 목적 유전자 특이적 시퀀스, 및 제2 목적 유전자를 포함하고, 상기 제3 목적 유전자 모듈은, 서열번호 14 및 15의 시퀀스, 상기 서열번호 14 및 15의 시퀀스 각각의 3' 말단에 연결된 제3 목적 유전자 특이적 시퀀스, 및 제3 목적 유전자를 포함하는 것인, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터
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제 13항에 있어서,상기 클로닝 벡터는 pLUG-Prime, pCR2
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제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따른 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터로 형질전환된 식물체
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제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따른 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터의 제조방법으로,바이너리 벡터 (binary vector)에 제2 제한효소 인식 부위를 삽입시켜 백본 벡터를 제조하는 단계;제2 제한효소 인식 부위를 갖는 프로모터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터를 제조하는 단계;제2 제한효소 인식 부위를 갖는 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터를 제조하는 단계;제2 제한효소 인식 부위를 갖는 목적 유전자 모듈을 제조하는 단계;제2 제한효소 인식 부위를 갖는 터미네이터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터를 제조하는 단계;상기 백본 벡터, 프로모터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터, 2A 펩타이드를 코딩하는 뉴클레오타이드 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터, 목적 유전자 모듈, 터미네이터 시퀀스가 삽입된 클로닝 벡터를 혼합한 다음, 제2 제한효소와 라이게이즈 첨가하여 효소 절단 및 라이게이션 공정을 동시에 실시하는 단계를 포함하는, 식물에 대한 폴리시스트론 발현용 벡터의 제조방법
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