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(a) 점 변이(point mutation)를 갖는 표적 시료를 제공하는 단계;(b) i) 표적 점 변이와 상보적으로 결합하는 표적 점 변이 결합 영역; ii) 프라이머 결합 영역; 및 iii) 바코드 생성 영역; 을 포함하는 템플레이트를 제공하고, 라이게이션을 수행하여, 환형 템플레이트를 형성하는 단계;(c) 상기 템플레이트의 프라이머 결합 영역에 상보적인 프라이머를 제공하여 중합효소연쇄반응을 수행하되, 증폭산물이 상기 (b) 단계에서 제공되는 템플레이트를 라이게이션시켜 환형 템플레이트를 추가적으로 형성하며; 상기 (b) 단계에서 생성된 환형 템플레이트의 프라이머 결합 영역에 상보적인 프라이머를 지속적으로 제공하여 지속적으로 증폭산물을 생성하는 단계; 및(d) 상기 (c) 단계에서 생성된 증폭산물에 포함된 바코드 생성 영역을 검출하여 표적 점 변이의 존재 여부를 판별하는 단계를 포함하는 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)을 이용한 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 템플레이트의 표적 점 변이 결합 영역은 템플레이트 양 말단에 존재하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 바코드 서열은 표적 점 변이 별로 미리 정의된 임의의 염기서열이며, 표적 점 변이와 상보적으로 결합하지 않는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 생성된 환형 템플레이트에 프라이머가 붙어 증폭산물을 추가적으로 생성하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 생성된 증폭산물이 새로운 템플레이트를 라이게이션시켜, 새로운 환형 템플레이트를 추가적으로 형성하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 표적 점 변이는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제6항에 있어서, 상기 하나 이상의 표적 점 변이 별로 서로 다른 염기서열을 가지는 템플레이트의 바코드 생성 영역이 증폭되어 생성된 바코드를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 템플레이트의 표적 점 변이 결합 영역은 표적 점 변이의 검출하고자 하는 지점이 라이게이션 반응에 의해 연결되도록 설계되는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 바코드에 상보적인 프로브를 포함하는 센서를 이용하여 상기 바코드를 검출하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제9항에 있어서, 상기 센서는 SPR(surface plasmon resonance), FET(field effect transistor), 나노입자, 캔틸레버 및 MEMS(micro electro mechanical system)로 구성된 군에서 선택된 것을 이용하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제9항에 있어서, 상기 바코드에 상보적인 프로브는 올리고뉴클레오티드, 잠금 핵산(LNA), 펩타이드 핵산(PNA), 트레오스 핵산(TNA), 글리콜 핵산(GNA), 브릿지 핵산(BNA) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제9항에 있어서, 상기 센서가 형광을 이용할 경우, 상기 바코드에 상보적인 프로브는 양 말단에 리포터(reporter) 및 소광자(quencher)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제12항에 있어서, 상기 리포터는 FAM, TET, JOE, YAKYE, HEX, CY3, ATTO550, TAM, ROX, TxRed, CY35, LC610, LC640, ATTO647N, CY5, 및 ATTO680 염료로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 형광 물질인 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제12항에 있어서, 상기 소광자는 TAM, BHQ1, BHQ2, BHQ3, BHQ650, DAB, 및 Eclip으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 라이게이션은 열적 안정성이 있는 리가아제(ligase)를 사용하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제15항에 있어서, 상기 리가아제는 Hifi Taq DNA 리가아제, Taq DNA 리가아제, 및 9°N™ DNA 리가아제로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 중합효소연쇄반응에서 가닥 변위 활성(strand displacement activity)이 없는 중합효소를 사용하는 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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제17항에 있어서, 상기 중합효소는 Phusion？ Hot Start Flex DNA 중합효소, Phusion？ High-Fidelity DNA 중합효소 Q5？ High-Fidelity DNA 중합효소 및 Q5？ Hot Start High-Fidelity DNA 중합효소로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 표적 점 변이 검출 방법
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(a) i) 표적 점 변이와 상보적으로 결합하는 표적 점 변이 결합 영역; ii) 프라이머 결합 영역; 및 iii) 바코드 생성 영역; 을 포함하는 템플레이트;(b) 상기 템플레이트의 프라이머 결합 영역에 결합하는 프라이머;(c) 중합효소(polymerase); 및(d) 리가아제(ligase);를 포함하는 표적 점 변이 검출을 위한 중합효소연쇄반응용 조성물
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