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일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터로 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균
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제1항에 있어서,상기 대장균은 수탁번호 KCTC 13990BP의 균주인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균
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제1항에 있어서,상기 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균
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제1항에 있어서,상기 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 암호화하는 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균
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제1항에 있어서,상기 재조합 발현벡터의 제작을 위한 기본벡터는 pET-21a(+), pET-14b, pET-15b, pET-16b, pET-19b, pET-20b(+), pET-21b(+), pET-21c(+), pET-21d(+), pET-22b(+), pET-23a(+), pET-23b(+), pET-23c(+), pET-23d(+), pET-24a(+), pET-24b(+), pET-24c(+), pET-24d(+), pET-25b(+), pET-26b(+), pET-27b(+), pET-29a(+), pET-29b(+), pET-29c(+), pET-31b(+), pET-32a(+), pET-32b(+), pET-32c(+), pET-32 Ek/LIC, pET-32 Xa/LIC, pET-34b(+), pET-35b(+), pET-36b(+), pET-37b(+), pET-38b(+), pET-39b(+), pET-40b(+), pET-41a(+), pET-41b(+), pET-41c(+), pET-41 Ek/LIC, pET-42a(+), pET-42b(+), pET-42c(+), pET-43
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제1항에 있어서,상기 재조합 발현벡터는 도 1a의 개열지도를 갖는 pET-21a(+)- JEV NS1 벡터인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균
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일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 암호화하는 유전자의 도입을 통해 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1을 과발현시키는 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균의 제조방법
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제1항의 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균을 배양하여 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)의 발현을 유도하고 이를 수득하는 단계를 포함하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제8항에 있어서,상기 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균은 수탁번호 KCTC 13990BP의 균주인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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(1) 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터로 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균을 형질전환시키는 단계;(2) 상기 (1) 단계에 의해 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균을 배양하여 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1의 과발현을 유도하는 단계;(3) 상기 (2) 단계의 과발현이 유도된 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균의 배양물로부터 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1을 정제하는 단계; 및(4) 상기 (3) 단계에서 정제된 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1을 투석 처리하는 단계를 포함하는,형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (1) 단계에서 재조합 발현벡터의 제작을 위한 기본벡터는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1의 분리 또는 정제를 위한 폴리히스티딘 태그(Polyhistidine Tag(His·Tag))가 포함된 벡터인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (1) 단계에서 재조합 발현벡터의 제작을 위한 기본벡터는 pET-21a(+), pET-14b, pET-15b, pET-16b, pET-19b, pET-20b(+), pET-21b(+), pET-21c(+), pET-21d(+), pET-22b(+), pET-23a(+), pET-23b(+), pET-23c(+), pET-23d(+), pET-24a(+), pET-24b(+), pET-24c(+), pET-24d(+), pET-25b(+), pET-26b(+), pET-27b(+), pET-29a(+), pET-29b(+), pET-29c(+), pET-31b(+), pET-32a(+), pET-32b(+), pET-32c(+), pET-32 Ek/LIC, pET-32 Xa/LIC, pET-34b(+), pET-35b(+), pET-36b(+), pET-37b(+), pET-38b(+), pET-39b(+), pET-40b(+), pET-41a(+), pET-41b(+), pET-41c(+), pET-41 Ek/LIC, pET-42a(+), pET-42b(+), pET-42c(+), pET-43
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제10항에 있어서,상기 (1) 단계의 재조합 발현벡터는 도 1a의 개열지도를 갖는 pET-21a(+)- JEV NS1 벡터인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (1) 단계의 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 암호화하는 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (2) 단계의 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균은 수탁번호 KCTC 13990BP의 균주인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (2) 단계의 과발현을 유도하는 것은 IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)를 0
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제10항에 있어서,상기 (3) 단계에서 배양물은 과발현이 유도된 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3))대장균의 배양물을 원심분리하여 수득한 펠렛(Pellet) 분획물인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제17항에 있어서,상기 펠렛 분획물은 GdnHCl(Guanidine hydrochloride) 용액으로 가용화(Solubilization)시키고 원심분리하여 수득한 상층액(Supernatant)인 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서,상기 (3) 단계의 정제는 친화성 크로마토그래피를 이용하되, (i) 컬럼에 형질전환 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균의 배양물로부터 획득한 대장균 파쇄액을 로딩하는 단계;(ii) 상기 컬럼에 5 M ~ 8 M Urea를 함유한 세척버퍼로 세척하는 단계; 및(iii) 상기 컬럼에 2 M ~ 4 M Urea를 함유한 용출버퍼로 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)단백질을 용출시키는 단계;로 수행하는 것을 특징으로 하는, 형질전환된 로제타(Rosetta(DE3)) 대장균으로부터 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 대량 생산하는 방법
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제10항에 있어서, 상기 (4) 단계의 투석 처리는,(i) 정제된 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1을 함유한 용출액을 1 M ~ 2 M Urea 및 200 mM ~ 300 mM Imidazole이 함유된 1차 투석용액으로 1차 투석 처리하고;(ii) 상기 1 차 투석 처리된 용액을 0
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제8항 내지 제20항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된, 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)
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제21항의 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 유효성분으로 포함하는, 일본 뇌염 백신 조성물
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제22항에 있어서, 상기 조성물에 추가로 아쥬반트(Adjuvant)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 일본 뇌염 백신 조성물
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제21항의 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 유효성분으로 포함하는, 일본 뇌염 바이러스에 대한 면역 반응 유도용 조성물
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제21항의 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 유효성분으로 포함하는, 일본 뇌염 진단용 조성물
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제25항의 조성물을 포함하는 일본 뇌염 진단 키트
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제21항의 면역원성을 갖는 일본 뇌염 바이러스 비구조단백질 1(Non-structural protein 1; JEV NS1)을 이용한 항원-항체 반응을 통해 일본 뇌염 바이러스를 검출하는 방법
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