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유전자가위(CRISPR/Cas9)의 절단 효율을 평가할 수 있는 리포터 구조물로서, 제1 프로모터(promoter) - 유전자 가위 표적 서열(target sequence) - Lac 리프레서(repressor) - 폴리(poly)A - 제2 프로모터(promoter) - Lac 오퍼레이터(operator) - 리포터(reporter) 유전자 - 폴리(poly)A 가 순차적으로 작동가능하게 연결되어 구성된 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 상기 제1 프로모터는 EF1 알파 프로모터이고 제2 프로모터는 CMV 프로모터인 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 상기 유전자 가위 표적 서열은 Cas9와 복합체를 형성하는 sgRNA가 특이적으로 인식할 수 있는 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase) 또는 EGFP (Enhanced Green Fluorescence Protein)를 발현하는 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 상기 리포터 구조물은 도 1의 개열지도를 갖는 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 상기 리포터 유전자가 EGFP 일 경우 EGFP의 백그라운드(Background) 발현을 줄이기 위해 EEGFP 뒤에 FKBP 서열을 집어 넣은 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항에 있어서, 표적의 순서 배열에 따른 유전자 가위의 활성 변화를 없애기 위하여 LacI 앞에 비특이적인 20 염기쌍의 M13 염기서열을 삽입한 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물
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제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 유전자 가위의 절단 효율 평가용 리포터 구조물을 포함하는 재조합 벡터
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제 8항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 기탁번호 KCTC14041BP (EF1a-LacI-oo-CMV-LUC) 또는 기탁번호 KCTC14042BP (EF1a-LacI-oo-CMV-GFP)로 기탁되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제 8항 또는 제 9항에 따른 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포
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제 10항에 있어서, 상기 세포는 진핵 세포인 것을 특징으로 하는 숙주 세포
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제 10항 또는 제 11항에 따른 숙주 세포 내로 sgRNA의 전사와 Cas9의 단백질발현이 함께 일어날 수 있는 벡터를 도입하는 단계;sgRNA의 전사와 Cas9의 단백질이 발현되는 조건하에서 세포를 인큐베이션하는 단계; 및세포에서 리포터 유전자 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하며,이때 리포터 유전자 발현의 증가된 수준은 표적 서열의 증가된 유전자가위-유도된 절단과 상호 관련되는 것을 특징으로 하는, 유전자 가위의 절단 효율의 평가 방법
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제 12항에 있어서, 상기 리포터 유전자 발현 수준을 측정함으로써 고효율의 sgRNA를 선별하는 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율의 평가 방법
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제 12항에 있어서, 헬릭스-턴-헬릭스 모티프(Helix-turn-Helix motif)가 제거된 기능이 없는(non-functional) LacI를 생산하는 리포터 구조물을 대조군으로 사용하는 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율의 평가 방법
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제 12항에 있어서, 표적 서열의 길이에 따라서 리포터 자체 백그라운드(background)가 증가되는 문제점을 극복하기 위하여 sgRNA의 효율을 유전자 가위로 절단하지 않은 대조군에 대한 상대적인 값으로 측정하여 평가하는 것을 특징으로 하는 유전자 가위의 절단 효율의 평가 방법
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