| 1 |
1
(a) 표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA(single guide RNA)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 Cas(CRISPR-associated nuclease) 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 재조합 벡터로 형질전환시켜 형질전환 식물체를 제조하는 단계; 및(b) 상기 형질전환 식물체와 야생형 식물체를 교배하는 단계를 포함하는 일대잡종(F1)에서 표적 유전자에 대한 동형접합 돌연변이체(homozygous mutant) 또는 이대립인자성 돌연변이체(biallelic mutant)의 제조 방법
|
| 2 |
2
제 1 항에 있어서, 상기 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 3, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 11 및 서열번호 13의 염기서열로 이루어진 것으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 3 |
3
제 1 항에 있어서, 상기 표적 유전자는 웅성불임과 관련된 유전자인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 4 |
4
제 1 항에 있어서, 상기 표적 유전자는 Os12BGlu38 유전자, OsHXK5 유전자 및 OsPLGG1 유전자로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 5 |
5
제 4 항에 있어서, 상기 Os12BGlu38 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것이고, 상기 OsHXK5 유전자는 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 것이고, 상기 OsPLGG1 유전자는 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 방법
|
| 6 |
6
제 1 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 형질전환 식물체는 동형접합 돌연변이체 또는 이대립인자성 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 7 |
7
(a) 표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, Cas 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 재조합 벡터로 형질전환시켜 형질전환 식물체를 제조하는 단계;(b) 상기 형질전환 식물체와 야생형 식물체를 교배하는 단계; 및(c) 형광표지 단백질을 발현하는 식물체를 선별하는 단계를 포함하는 웅성불임 유지친(male sterile maintainer)의 제조 방법
|
| 8 |
8
제 7 항에 있어서, 상기 형광표지 단백질을 발현하는 식물체는 동형접합 돌연변이체 또는 이대립인자성 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 9 |
9
(a) 표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, Cas 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 재조합 벡터로 형질전환시켜 형질전환 식물체를 제조하는 단계;(b) 상기 형질전환 식물체와 야생형 식물체를 교배하는 단계; 및(c) 형광표지 단백질을 발현하지 않는 식물체를 선별하는 단계를 포함하는 Non-GMO(Non-Genetically Modified Organism) 식물체의 제조 방법
|
| 10 |
10
제 9 항에 있어서, 상기 형광표지 단백질을 발현하지 않는 식물체는 이형접합 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 방법
|
| 11 |
11
제 9 항에 있어서, 상기 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 14의 염기서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 12 |
12
표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, Cas 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터로서, 상기 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 3, 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 11 및 서열번호 13의 염기서열로 이루어진 것에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
|
| 13 |
13
제 12 항에 있어서, 상기 sgRNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 3, 서열번호 11 및 서열번호 13의 염기서열로 이루어진 것에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
|
| 14 |
14
제 12 항에 있어서, 상기 표적 유전자는 Os12BGlu38 유전자, OsHXK5 유전자 및 OsPLGG1 유전자로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
|
| 15 |
15
제 12 항에 있어서, 상기 형광표지 단백질은 녹색형광단백질(GFP), 황색형광단백질(YFP), 적색형광단백질(RFP) 및 시안형광단백질(CFP)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
|
| 16 |
16
제 12 항에 있어서,상기 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 14의 염기서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
|
| 17 |
17
제 12 항의 재조합 백터로 형질전환된 형질전환 식물체
|
| 18 |
18
제 17 항에 있어서, 상기 식물체는 표적 유전자에 대한 동형접합 돌연변이체 또는 이대립인자성 돌연변이체인 것을 특징으로 하는 형질전환 식물체
|
| 19 |
19
제 17 항의 형질전환 식물체의 종자
|
