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신규경로를 이용한 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 제조방법

  • 기술번호 : KST2021012110
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 신규 경로를 기반의 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 폴리 하이드록시 알카노에이트 (Poly hydroxy alkanoate, PHA) 합성 유전자, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 유전자 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 유전자 (4-hydroxybutyryl-CoA dehydratase)를 도입한 신규합성 경로를 이용하여 높은 함량의 4-하이드록시부티레이트 (4-hydroxybutyrate)를 갖는 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체를 생산하는 제조 방법 및 신규 경로가 도입된 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 미생물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 아세틸-CoA로부터 3-하이드록시부틸릴-CoA를 거쳐 전환된 4-하이드록시부틸릴-CoA를 poly (3-hydroxybutyrate)(PHB)에 혼입함으로써 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체를 생산할 수 있으며, 이는 기존 4-하이드록시부틸릴-CoA 생합성 및 3-하이드록시부티레이트 공중합체 생산 경로와 차별화된 경로로써 CoA, NHDH (또는 NADPH)등의 보조인자의 공급 및 4-하이드록시부틸릴-CoA 전이효소의 활성에 영향을 받지 않고 비교적 단순한 전환 단계를 통해 및 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체를 생산할 수 있으며, 4-하이드록시부티레이트의 함량의 향상을 통한 생분해성 폴리머의 물성 향상을 기대할 수 있다는 장점이 있다.
Int. CL C12N 15/70 (2006.01.01) C12N 9/88 (2006.01.01) C12N 9/10 (2006.01.01) C12N 9/04 (2006.01.01) C12N 9/02 (2006.01.01) C12N 15/10 (2017.01.01) C12N 15/74 (2006.01.01) C12P 1/04 (2006.01.01) C12P 7/42 (2006.01.01)
CPC C12N 15/70(2013.01) C12N 9/88(2013.01) C12N 9/1029(2013.01) C12N 9/0006(2013.01) C12N 9/001(2013.01) C12N 9/1025(2013.01) C12N 15/102(2013.01) C12N 15/74(2013.01) C12P 1/04(2013.01) C12Y 402/01055(2013.01) C12Y 402/0112(2013.01) C12Y 203/01016(2013.01) C12Y 101/01036(2013.01) C12Y 103/01085(2013.01) C12Y 401/03001(2013.01) C12Y 203/03009(2013.01) C12P 7/42(2013.01)
출원번호/일자 1020200041392 (2020.04.06)
출원인 경희대학교 산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2021-0124585 (2021.10.15) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 공개
심사진행상태 수리
심판사항
구분 국내출원/신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 N
심사청구항수 23

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 경희대학교 산학협력단 대한민국 경기도 용인시 기흥구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이은열 서울특별시 강남구
2 이옥경 경기도 수원시 영통구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 위병갑 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로**길 * *층(대영빌딩)(위특허법률사무소)

최종권리자

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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2020.04.06 수리 (Accepted) 1-1-2020-0354101-44
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번호 청구항
1 1
폴리 하이드록시알카노에이트 (Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 유전자 클러스터, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
2 2
제 1항에 있어서,상기 폴리 하이드록시알카노에이트(Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 유전자 클러스터는 β-케토티올라아제, 아세토아세틸-CoA 환원효소 및 PHB 신타아제의 조합이며,상기 β-케토티올라아제는 아세틸 CoA를 아세토아세틸-CoA 로 전환하는 효소이고,상기 아세토아세틸-CoA 환원효소는 아세토아세틸-CoA를 3-하이드록시부틸 CoA로 전환하는 효소이며,상기 PHB 신타아제는 3-하이드록시부틸 CoA를 PHB로 중합하는 효소인, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
3 3
제 1항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트 (Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 클러스터를 코딩하는 유전자 phaABC는 서열번호 1의 염기서열로 표시된 것을 특징으로 하는, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
4 4
제 1항에 있어서, 상기 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소는 3-하이드록시부틸릴 CoA로부터 crotonyl CoA의 전환을 촉매하는 효소인, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
5 5
제 1항에 있어서, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 코딩하는 유전자 CroR는 서열번호 2 또는 3의 염기서열로 표시된 것을 특징으로 하는, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
6 6
제 1항에 있어서, 상기 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소는 crotonyl CoA로부터 4-하이드록시부틸릴 CoA의 전환을 촉매하는 효소인, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
7 7
제 1항에 있어서, 상기 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자 abfD는 서열번호 4, 5 또는 6의 염기서열로 표시된 것을 특징으로 하는, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
8 8
3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는, 3-하이드록시부티레이트-4-하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 재조합 벡터
9 9
crotonyl-CoA carboxylase/reductase의 유전자를 녹아웃 (knockout)시킨 것을 특징으로 하는, 유전자 제거용 벡터
10 10
제9항에 있어서,상기 crotonyl-CoA carboxylase/reductase를 코딩하는 유전자는 서열번호 7의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는, 유전자 제거용 벡터
11 11
crotonyl-CoA carboxylase/reductase의 유전자를 녹아웃 (knockout)시킨 것을 특징으로 하는, 유전자 제거 및 삽입용 벡터에서,상기 crotonyl-CoA carboxylase/reductase 제거용 벡터는 추가로 glyoxylate shunt 관련 유전자 이소시트레이트 리아제와 말산 신타아제를 삽입한 것을 특징으로 하는, 유전자 제거 및 삽입용 벡터
12 12
제 11항에 있어서, 상기 이소시트레이트 리아제를 코딩하는 유전자는 서열번호 7의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하고, 말산 신타아제를 코딩하는 유전자는 서열번호 8의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하고, 유전자 제거 및 삽입용 벡터
13 13
제 1항에 있어서, 폴리 하이드록시알카노에이트 (Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 유전자 클러스터, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자가 도입된, 4-하이드록시부틸릴-CoA 또는 3-하이드록시부틸레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 대장균
14 14
제 8항에 있어서, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자가 도입된, 4-하이드록시부틸릴-CoA 또는 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 라스토니아 유트로파 (Ralstonia eutropha)
15 15
제 1항에 있어서, 폴리 하이드록시알카노에이트(Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 유전자 클러스터, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자가 도입된, 4-하이드록시부틸릴-CoA 또는 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 type I 형질전환 메탄자화균
16 16
제 8항에 있어서, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자가 도입된, 4-하이드록시부틸릴-CoA 또는 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 type II 형질전환 메탄자화균
17 17
제15 내지 16항에 있어서, 상기 메탄자화균은 메틸로모나스 속(Methylomonas), 메틸로박터 속(Methylobacter), 메틸로코커스 속(Methylococcus), 메틸로스페라 속(Methylosphaera), 메틸로칼덤 속(Methylocaldum), 메틸로글로버스 속(Methyloglobus), 메틸로사르시나 속(Methylosarcina), 메틸로프로펀더스 속(Methyloprofundus), 메틸로썰머스 속(Methylothermus), 메틸로할로비우스 속(Methylohalobius), 메틸로게아 속(Methylogaea), 메틸로마리넘 속(Methylomarinum), 메틸로벌럼 속(Methylovulum), 메틸로마리노범 속(Methylomarinovum), 메틸로러브럼 속(Methylorubrum), 메틸로파라코커스 속(Methyloparacoccus), 메틸로시스티스 속(Methylocystis), 메틸로셀라 속(Methylocella), 메틸로캡사 속(Methylocapsa), 메틸로퍼룰라 속(Methylofurula), 메틸아시디필럼 속(Methylacidiphilum), 메틸아시디마이크로븀 속(Methylacidimicrobium), 메틸로마이크로븀(Methylomicrobium) 속 또는 메틸로시 너스 속(Methylosinus) 균주인, 형질전환 메탄자화균
18 18
제15항에 있어서,상기 메탄자화균은 메틸로마이크로븀 알칼리필리엄(Methylomicrobium alcaliphilum) 20Z인, 형질전환 메탄자화균
19 19
제16항에 있어서,상기 메탄자화균은 메틸로시너스 트리코스포륨(Methylosinus trichosporium) OB3b인, 형질전환 메탄자화균
20 20
제19항에 있어서, 상기 형질전환 메탄자화균은 추가로 크락토닐 CoA 카르복실라아제/환원효소의 내재된 활성을 약화 또는 제거하고 그 위치에 이소시트레이트리아제 (isocitrate lyase, ICL) and 말산 신타아제 (malate synthase, MS) 유전자를 도입한 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 메탄자화균
21 21
제20항에 있어서,상기 형질전환 메탄자화균은 β-케토티올라아제, 아세토아세틸-CoA 환원효소, PHB 신타아제 유전자를 도입한, 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 생산용 형질전환 메탄자화균
22 22
제1항 내지 제8항 또는 제13 내지 제16항 중 어느 한 항의 형질전환 미생물을 포함하는, 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 제조 방법
23 23
폴리 하이드록시알카노에이트 (Polyhydroxyalkanoate, PHA) 합성 유전자 클러스터, 3-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소 (3-hydroxybutyryl-CoA dehydratase) 및 4-하이드록시부틸릴 CoA 탈수 효소를 코딩하는 유전자를 이용한 3-하이드록시부티레이트 4­하이드록시부티레이트 공중합체 제조방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 한국연구재단 경희대학교 C1 가스리파이너리 사업 메탄-메탄올 전환 플랫폼 균주 개발