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ⅰ) pCRCT 벡터의 CRISPR 어레이 클로닝 부위를 제거하고, 타겟 유전자의 gRNA 스캐폴드 서열 및 터미네이터를 삽입하여 gRNA 발현을 위한 pCRCU 벡터를 제작하는 단계;ⅱ) 리팩토링하고자 하는 타겟 유전자의 프로모터 부위로부터 유래된 스페이서 서열 및 이에 연결된 제한효소 인식 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 합성하는 단계; 및ⅲ) 상기 폴리뉴클레오티드를 골든게이트(Golden-gate) 방식으로 상기 pCRCU 벡터에 클로닝하여 gRNA를 발현하는 단계를 포함하는 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 gRNA 스캐폴드는 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes)의 CRISPR/Cas9 시스템에 존재하는 프로토 스페이서 인접 모티프 염기서열로부터 유래된 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 상이한 프로모터 부위에서 유래된 20bp의 스페이서를 각각 포함하는 다수의 서열인 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 1 또는 2이상의 스페이서 서열을 포함하는 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 추가적인 gRNA 스캐폴드 서열, 터미네이터 및 프로모터를 포함하는 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 상기 CRISPR 플라스미드에 1 또는 2이상 포함되도록 클로닝되는 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 CRISPR 플라스미드는 영양 요구성 선택 표지 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제7항에 있어서, 상기 선택 표지 유전자는 URA3, HIS3, MET15, TRP1, LEU2 및 LYS2로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 선택 표지 유전자인 것인, 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드의 제조 방법
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제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 제조 방법에 의해 제조된 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드
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제9항에 있어서, 상기 프로모터 다중화 리팩토링을 위한 CRISPR 플라스미드는 효모의 생합성 유전자군 내에 포함되는 다수의 프로모터 부위를 동시에 대체할 수 있는 것인 플라스미드
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타겟 유전자의 gRNA 스캐폴드를 포함하는 pCRCU 벡터; 및 상기 타겟 유전자의 다수의 프로모터로부터 유래한 스페이서 서열을 각각 포함하는 1 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 CRISPR 플라스미드
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제11항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 1 또는 2개 이상의 스페이서 서열을 포함하는 것인, CRISPR 플라스미드
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제9항의 플라스미드를 효모에 형질 전환하여 생합성 유전자군을 리팩토링 하는 방법
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제13항에 있어서, 상기 리팩토링 방법은 상기 생합성 유전자군 내에 존재하는 다수의 프로모터를 동시에 대체하는 것인 리팩토링 방법
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제11항의 플라스미드를 효모에 형질 전환하여 생합성 유전자군을 리팩토링 하는 방법
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